[发明专利]一种从粘杆菌素发酵液中分离粘杆菌素A和粘杆菌素B的方法

摘要

本发明涉及一种从粘杆菌素发酵液中分离粘杆菌素A和粘杆菌素B的方法，该方法首先将粘杆菌素发酵液的粘度降至400～500Pa.s，后降温至0～10℃，调节pH至2～3，然后加入其重量的0.5%～0.8%的絮凝剂，充分搅拌后过滤，所得滤液降膜浓缩至其体积的30％～50％，之后进行二级逆流萃取，所得萃取液通过层析分离方式分离得到粘杆菌素Ａ溶液和粘杆菌素B溶液，分别将粘杆菌素Ａ溶液和粘杆菌素B溶液采用二级逆流反萃取、喷雾干燥后得到硫酸粘杆菌素A和硫酸粘杆菌素B的盐粉末。本发明实现了粘杆菌素A和B的有效分离，提高了其质量，使其含量分别在97%以上，总提取收率达到88～92%，降低生产成本；避免了重金属和废水的污染问题，降低了环保压力。

主权项

一种从粘杆菌素发酵液中分离粘杆菌素A和粘杆菌素B的方法，其特征在于其工艺步骤为：首先将粘杆菌素发酵液的粘度降至400～500Pa.s，后降温至0～10℃，调节pH至2～3，然后加入其重量的0.5%～0.8%的絮凝剂，充分搅拌后过滤，所得滤液降膜浓缩至其体积的30％～50％，之后启动高速离心分离机进行二级逆流萃取，所得萃取液通过层析分离方式分离得到粘杆菌素Ａ溶液和粘杆菌素B溶液，分别将粘杆菌素Ａ溶液和粘杆菌素B溶液采用二级逆流反萃取、喷雾干燥后得到硫酸粘杆菌素A和硫酸粘杆菌素B的盐粉末；所述絮凝剂为氨甲基聚苯乙烯或阳离子聚丙烯酰胺；所述层析是以DEAE高流速琼脂糖微球为填充剂、醋酸丁酯为洗脱剂进行的，其中填充剂用量为萃取液体积的3～5%，填充剂的径高比控制在5∶1，洗脱剂用量为萃取液体积的40～50%，层析过程中，控制萃取液温度0～10℃，每次萃取液上样量为填充剂用量20～30%；所述二级逆流萃取的工艺条件为：a 萃取温度：0～10℃，b V粘杆菌素滤液︰V有机溶媒=1︰5～10，，所述有机溶媒为醋酸丁酯和丁醇的混合物，其中丁醇的含量为5%～10%，c pH：一级萃取pH控制在8～9，二级萃取pH控制在9～10，d 萃余液效价低于1000u/ml；所述二级逆流反萃取的控制参数为：a 温度控制在0～5℃；b pH：一级控制pH值3.5～4.5；二级控制pH值2.0～3.0；c 效价：废醋酸丁酯效价低于500μ/ml；d 浓度：硫酸溶液浓度为3.6～3.8％（W/V）；e 搅拌时间：加酸后搅拌时间：一级反萃取20～35min ；二级反萃取15～25min；f 澄明度：反萃取液澄清透明，无可见溶媒；g 水相用量：一级反萃取：V硫酸滤液︰V有机溶媒=1︰3～5(L/L)二级反萃取：V硫酸滤液︰V有机溶媒=1︰5～8(L/L)。