[发明专利]一种黄瓜游离小孢子的灭菌方法

摘要

本发明属于植物组织培养的灭菌方法领域，提供一种黄瓜游离小孢子的灭菌方法；该方法将黄瓜花蕾进行消毒处理步骤、小孢子释放处理步骤、小孢子离心处理步骤，得到无菌的纯化小孢子；所述小孢子离心处理步骤使用的灭菌提取液中含有抗菌剂。本发明是在提取纯化小孢子的过程中的灭菌提取液中加入抗菌剂进行灭菌的，抗菌剂和小孢子接触充分，灭菌彻底；在提取纯化过程中加入抗菌剂，处理后离心弃上清，不会对小孢子的后期培养造成不良影响；通过严格控制抗菌剂的浓度、处理时间和摇床的转速，既能够达到灭菌目的又不影响后期小孢子的正常膨大、细胞分裂和胚胎发育；灭菌效果好，抗菌剂用量大大减少，对环境友好。

主权项

一种黄瓜游离小孢子的灭菌方法，其特征在于：该方法将黄瓜花蕾进行消毒处理步骤、小孢子释放处理步骤、小孢子离心处理步骤，得到无菌的纯化小孢子；所述小孢子离心处理步骤使用的灭菌提取液中含有抗菌剂；所述抗菌剂为植物组培抗菌剂；所述灭菌提取液中，抗菌剂的质量体积比为0.2‑0.3％；所述灭菌提取液为，以基本提取液为基础，添加质量体积比为0.2‑0.3％的抗菌剂；所述基本提取液是以B5基本培养基为基础，添加质量体积比为10‑14％的蔗糖；所述花蕾消毒处理步骤为：将黄瓜花蕾依次用酒精溶液和次氯酸钠溶液消毒，再用无菌水冲洗，得到消毒后的花蕾；所述小孢子释放处理步骤为：将所述消毒后的花蕾加入基本提取液，再进行挤压处理、过筛处理，得到小孢子滤液；所述小孢子离心处理步骤为：将所述小孢子滤液进行第一轮离心处理，保留沉淀，再加入所述灭菌提取液；再进行振荡处理、第二轮离心处理，保留沉淀，得到所述无菌的纯化小孢子；所述小孢子离心处理步骤中，所述第一轮离心处理的次数为2次，每次转速为500‑1000rpm，时间为2‑5min，每次均弃上清液保留沉淀；所述第一轮离心处理完成后，再向得到的沉淀中加入灭菌提取液；再进行振荡处理，所述振荡处理的时间为20‑40min，转速为30‑50rpm；所述第二轮离心处理的次数为1次，转速为500‑1000rpm，时间为2‑5min，弃上清液保留沉淀。