[发明专利]一种苏云金芽孢杆菌几丁质酶的突变酶制备及其应用无效
| 申请号： | 201410441598.8 | 申请日： | 2014-09-01 |
| 公开（公告）号： | CN104232607A | 公开（公告）日： | 2014-12-24 |
| 发明（设计）人： | 倪红;孙孝文;李林;曾思泉 | 申请（专利权）人： | 湖北大学 |
| 主分类号： | C12N9/42 | 分类号： | C12N9/42;C12N15/56;C12N15/10;C12N15/70;A01N63/02;A01P3/00;A01P7/04;A01P5/00 |
| 代理公司： | 武汉河山金堂专利事务所 42212 | 代理人： | 丁齐旭 |
| 地址： | 430062 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提出了一种苏云金芽孢杆菌几丁质酶Chi9602的突变酶制备及其应用，步骤为：对几丁质酶Chi9602基因进行同源建模和分子对接，选取突变位点；采用重叠延伸PCR进行定点突变，获得突变酶基因chiw50a；突变酶基因回收后，经Bgl II和Pst I双酶切，连接到表达载体pTrcHis B上，构建质粒pMB581；将质粒转化到大肠杆菌宿主细胞中，经IPTG诱导表达、亲和层析纯化制备突变酶ChiW50A。该突变酶较原始酶的酶比活提高了62.3％达到了83.46U/mg，最适pH为7.0，且在pH 9.0仍然具有高酶比活(54.69U/mg)，可用于生物防治植物病虫害，具有明显的抗真菌和杀虫增效作用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 苏云金 芽孢 杆菌 几丁质 突变 制备 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种苏云金芽孢杆菌几丁质酶Chi9602的突变酶W50A，其特征在于：所述的突变酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述突变酶理论分子量为74.45kDa，属于糖基水解酶第18家族，由几丁质酶催化域CCD(Lys42‑Asp452)、类纤连蛋白Ⅲ型域Fn3D(Gln504‑Asn558)和几丁质酶结合域CBD(Thr582‑Asn646)三部分构成；保守序列为“DGVDLDWE”，N末端结构域中含有一个由34个氨基酸残基组成的信号肽序列SP(Met1‑Ala34)。
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