[发明专利]一种克服菊芋茎尖超低温保存后再生苗玻璃化的方法

摘要

本发明提供一种克服菊芋茎尖超低温保存后再生苗玻璃化的方法，在预培养阶段、装载阶段、PVS2玻璃化保护阶段、洗涤卸载阶段所使用的试剂中，均用果糖代替蔗糖，进行超低温保存处理。本发明的方法可有效地防止超低温保存后菊芋茎尖再生后玻璃化现象的发生，植株不经愈伤直接再生率可达40％以上，易于操作，适用于菊芋茎尖的超低温保存。

主权项

一种克服菊芋茎尖超低温保存后再生苗玻璃化的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)预培养：切取菊芋组培苗茎尖，在含有0.3‑0.4mol/L果糖的MS液体培养基中，25℃暗培养2‑3天；2)装载：预培养后的茎尖在含有2.0mol/L甘油和0.4mol/L果糖的MS液体培养基中25℃装载30‑40min；3)PVS2玻璃化保护剂处理：装载后的茎尖转入改良的PVS2玻璃化保护剂中0℃脱水处理15‑40min；4)小滴玻璃化法超低温保存：步骤3)处理后的茎尖置于铝箔条上，向茎尖上滴加改良的PVS2玻璃化保护剂，使茎尖完全包裹于由保护剂形成的液滴中，将铝箔条置于冻存管中，然后投入液氮中保存；5)解冻和洗涤：从液氮中取出冻存管，将铝箔条上的茎尖浸入含有1.2mol/L果糖的MS培养液中室温解冻和洗涤；6)步骤5)处理后茎尖转入恢复培养基中恢复培养；其中，步骤3)和4)中所述改良的PVS2玻璃化保护剂为含有30％甘油、15％二甲基亚砜、15％乙二醇和0.4mol/L果糖的MS液体培养基。