[发明专利]完整获取组织内核糖体新生肽链复合物的方法

摘要

本发明公开一种完整获取组织内核糖体新生肽链复合物的方法。该方法为使用0～4℃的含翻译延伸抑制剂和镁离子的等渗盐溶液清洗新鲜的组织；将清洗干净的组织中的多余液体去除，然后用液氮进行快速冷冻处理，冷冻至组织的温度稳定；将快速冷冻处理好的组织置于不高于‑80℃的环境下保存，在该条件下，能进行储存和运输；对保存的组织样品提取RNC，得到组织内核糖体新生肽链复合物。本发明能够进行组织内RNC长期储存和运输，有效地获取组织样品的RNC；而且突破了时间和空间的限制，为进一步研究RNC以及RNC的商业化服务提供了便利。

主权项

一种完整获取组织内核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)使用0～4℃的含翻译延伸抑制剂和镁离子的等渗盐溶液清洗新鲜的组织；翻译延伸抑制剂和镁离子的浓度以能有效抑制组织内细胞翻译延伸为基准；(2)将清洗干净的组织中的多余液体去除，然后用液氮进行快速冷冻处理，冷冻至组织的温度稳定；(3)将快速冷冻处理好的组织置于不高于‑80℃的环境下保存，在该条件下，能进行储存和运输；(4)对步骤(3)保存的组织提取核糖体新生肽链复合物，步骤如下：将组织置于液氮环境中，将其进行磨碎；研磨完毕后保持在液氮环境中，加入预冷至0～4℃的细胞裂解液，继续研磨混匀；然后置于冰上等待完全融化，进行裂解反应；将裂解好的组织样品于2～6℃离心，取上清；使用蔗糖密度梯度离心法获取组织样品的核糖体新生肽链复合物；所述的细胞裂解液组成如下：20mM、pH7.4的HEPES‑KOH溶液，15mMMgCl2，200mM KCl，100μg/ml放线菌酮，2mM二硫苏糖醇，体积百分比1％的Triton X‑100，pH＝7.4；步骤(1)中所述的镁离子在所述的等渗盐溶液中的终浓度为50mM或超过50mM。