[发明专利]一种快速筛选多倍体植物目的基因克隆产物的引物、方法

摘要

本发明属于生物技术领域，提供一种快速筛选多倍体植物目的基因克隆产物的引物、方法及二者在菊花上的应用以及该引物在试剂盒上的应用。快速筛选目的基因克隆产物的方法包括：(1)引物设计(2)基因克隆扩增(3)检测引物筛选基因克隆产物，确定克隆产物对应的基因是否为目的基因。本发明解决了现有技术中，筛选菊花等多倍体植物目的基因克隆产物过程复杂、效率低下的问题。通过本发明提供的检测引物，每增加1bp长度，筛选目的基因的准确性即提高4倍。例如检测引物长度为18bp，则在原基础上筛选度提高了418倍。检测引物为复杂基因组基因的分子克隆提供思路，大大提高了基因克隆的效率。

主权项

1.一种快速筛选菊花目的基因克隆产物的引物，其特征在于：包括5’RACE反向扩增的引物，该引物包括反转录引物、特异性扩增引物、正、反向检测引物和接头引物，引物长度分别为16‑30 bp，Tm 55‑65℃，正向和反向检测引物相距100‑200 bp，检测引物在特异性扩增引物之一GSP5’‑3上游；反转录引物为：GSP5’‑1：如SEQ ID NO.5所示；特异性扩增引物为：GSP5’‑2：如SEQ ID NO.6所示GSP5’‑3：如SEQ ID NO.7所示；检测引物为：5’RACE JC‑F：如SEQ ID NO.3所示5’RACE JC‑R：如SEQ ID NO.4所示；接头引物为：AAP序列：GGCCACGCGTCGACTAGTACGGGIIGGGIIGGGIIG；AUAP序列：GGCCACGCGTCGACTAGTAC；包括3’RACE正向扩增的引物，该引物包括特异性扩增引物、正、反向检测引物和接头引物，引物长度分别为16‑30 bp，Tm 55‑65℃，正向和反向检测引物相距100‑200 bp，检测引物在特异性扩增引物之一GSP3’‑3下游；特异扩增引物为：GSP3’‑1：如SEQ ID NO.8所示GSP3’‑2：如SEQ ID NO.9所示GSP3’‑3：如SEQ ID NO.10所示；检测引物为：3’RACE JC‑F：如SEQ ID NO.11所示3’RACE JC‑R：如SEQ ID NO.12所示；接头引物为：AP：CTGATCTAGAGGTACCGGATCC；dT‑AP序列：CTGATCTAGAGGTACCGGATCCTTTTTTTTTTTTTTTT；包括中间片段进行扩增时的引物，该引物包括特异性扩增引物和正、反向检测引物，引物长度分别为16‑30 bp，Tm 55‑65℃，正向和反向检测引物相距100‑200 bp，正向检测引物在正向特异扩增引物的下游，反向检测引物在反向特异扩增引物的上游，正向特异性扩增引物与正向检测引物相距50‑100 bp，反向特异性扩增引物与反向检测引物相距50‑100 bp；特异扩增引物为：中间GSP‑F：如SEQ ID NO.13所示中间GSP‑R：如SEQ ID NO.14所示；检测引物为：中间JC‑F：如SEQ ID NO.15所示中间JC‑R：如SEQ ID NO.16所示。