[发明专利]鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法

摘要

本发明涉及鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法，属于生物发酵检测技术领域。该方法包括鸟苷发酵液样品采集和制备、光谱采集、鸟苷发酵液红外吸收特征峰位置的确定、鸟苷发酵前、中、后期指纹图谱的构建和指纹图谱的验证五大步骤。通过本发明构建鸟苷发酵不同时间段的红外指纹图谱，实现了利用红外指纹图谱方便快捷的监控鸟苷发酵过程，建立红外指纹图谱监测鸟苷发酵过程的新方法，为生物发酵过程的优化控制开辟更为便捷的新途径。

主权项

鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法，其特征在于包括如下步骤：步骤(1)，发酵液样品采集和制备：1)菌种活化取平板上的单菌落划线接种于活化斜面，36‑38℃恒温静置培养12‑14h；2)种子培养接两环生长良好的活化斜面菌种放入装有种子培养基的摇瓶中，纱布封口，置于往复式摇床上，36‑37℃振荡培养12‑18h，得到种子液；3)鸟苷发酵将上述种子液以10％的接种量接入装有发酵培养基的三角瓶中，置于往复式摇床上或发酵罐中，36‑37℃，培养72h，获得发酵液；4)采集将10批次的鸟苷发酵每隔9h从三个平行样品中分别采集3份发酵液样品，其中0‑27h所采样品为发酵前期样品、27‑45h的样品为发酵中期样品，45‑72h的样品为发酵后期样品；步骤(2)，发酵液鸟苷含量的测定：发酵液中鸟苷含量采用常用的高效液相色谱法定量测定；步骤(3)，光谱采集：利用红外光谱仪采集光谱，以空气为参比，对步骤(1)得到的发酵前、中、后期样品的发酵液分别重复扫描次数5次，取平均光谱；步骤(4)，鸟苷发酵液红外吸收特征峰位置的确定：利用纯水、鸟苷标准品及发酵上层清液为对照，确定发酵液红外特征峰的位置；步骤(5)，鸟苷发酵前、中、后期指纹图谱的构建：以鸟苷发酵液特征峰为主要研究对象，根据步骤(2)测定的发酵液中的鸟苷含量，研究鸟苷发酵前、中、后期红外吸收图谱特征，构建指纹图谱；步骤(6)，指纹图谱的验证：10批次摇床及5批次发酵罐验证指纹图谱可靠性；所述的红外光谱的波长范围为4000‑600cm‑1；所述的发酵罐发酵的温度为36℃，pH6.5，溶氧30‑40％；所述的红外光谱仪为德国BRUKER Tensor 27红外光谱仪。