[发明专利]埃博拉五重荧光PCR快速超敏检测试剂盒及其应用

摘要

本发明提供了在单个PCR反应容器中五重检测核酸提取液中靶核酸的实时PCR方法，用于同时检测是否存在埃博拉-扎伊尔型(EBO-Zaire)、埃博拉-苏丹型(EBO-Sudan)、埃博拉-本迪布焦型(EBO-Bundibugyo)、埃博拉-塔伊森林型(EBO-Taiforest)和埃博拉-莱斯顿型(EBO-Restor)等埃博拉病毒亚型。该方法能有效避免假阴性和假阳性结果的产生，对于埃博拉病毒检测来说是非常有实际意义的。本发明还提供了用于实施上述方法的检测试剂盒及其应用等。

主权项

在单个PCR反应容器中五重检测核酸提取液中靶核酸的实时PCR方法，所述靶核酸来自埃博拉‑扎伊尔型(EBO‑Zaire)、埃博拉‑苏丹型(EBO‑Sudan)、埃博拉‑本迪布焦型(EBO‑Bundibugyo)、埃博拉‑塔伊森林型(EBO‑Taiforest)和埃博拉‑莱斯顿型(EBO‑Restor)，其包括：(1)在所述单个PCR反应容器中混合核酸提取液、DNA聚合酶、逆转录酶、RNA保护剂、dNTP、靶核酸引物对和靶核酸探针，其中所述探针标记有荧光基团和淬灭基团，而且各种探针标记的荧光基团的荧光检测波长互不相同，其中，靶核酸引物对包括GCCACTCACGGACAATGACA，GCATGCGAGGGCTGGTT，GGCAGCTCTTGGCTCACTTG，TGAGGAGACGTGCAAATGGA，ACCTCCGACGCGGTACAC，TGTGGGTGAACAGGAACATCA，GACCCGGATGATGGCAGAT，GGCATTCGCCGTCTCACTA，GCACCGAGGCCCAGAAC，和CTTCGTGCACTGGTGAGAGTCT，靶核酸探针包括：AAGAAATGAACCCTCCGGC，CAAGCATGGAGAATAT，CAAGACAGGCAACCTA，CAACAATTATGGAGACTATC，和TACGACCGCCAATCG；(2)进行PCR反应，并实时检测不同波长的荧光；和，(3)根据荧光检测结果判断是否有靶核酸存在于核酸提取液中。