[发明专利]利用新鲜猪角膜制备组织工程角膜载体支架的方法及应用

摘要

一种利用新鲜猪角膜制备组织工程角膜载体支架的方法及应用。首先切取新鲜猪角膜片进行溶胀，再反复冻融破碎细胞后，DNA-RNA酶处理去除残留核酸物质，然后交联、风干，最后电离射线进行辐照灭菌制成。本发明应用于组织工程角膜上皮、基质、内皮、前板层半角膜、后板层半角膜和全层角膜的载体支架，从而满足组织工程角膜批量生产的需要。用作人角膜基质的替代物而用于未累及全层的角膜溃疡的临床移植和治疗。本发明适于规模化生产和临床推广应用。所制备的角膜载体支架具有透明性好、结构致密、机械性强、与人角膜种子细胞生物相容性好等特点。因而适于批量生产，从而满足了组织工程角膜所用大量载体支架的需要。

主权项

一种利用新鲜猪角膜制备组织工程角膜载体支架的方法，其特征是首先取新鲜猪眼球，用0.9％(w/v)生理盐水冲洗干净后，用微型角膜刀切取厚度100～500微米的角膜片；再用低渗溶液对切取的角膜片溶胀2～3小时，去除角膜上皮层，获得角膜基质片；再将该角膜基质片在‑80℃冰箱冻1～2小时后，于37℃融化10～30分钟，冻融重复3～5遍；然后用漂洗缓冲液漂洗2次，每次15～20分钟；再将冻融漂洗后的角膜基质片放入溶于DNA‑RNA酶溶液，于37℃处理2～4小时后，用漂洗缓冲液漂洗2次，每次15～20分钟，再用超纯水漂洗15～20分钟，获得脱细胞角膜基质片；然后将脱细胞角膜基质片浸入角膜专用交联剂溶液中，于37℃浸泡处理20～30分钟后，利用波长310～400纳米的紫外光照射20～30分钟，照射距离为2～10厘米；之后用0.9％(w/v)生理盐水漂洗2次，每次15～20分钟后，再用超纯水漂洗2次，每次15～20分钟；最后将交联漂洗后的脱细胞角膜基质片平铺于24孔培养板中，风干48～72小时后使用剂量为14～25kGy的电离射线进行辐照灭菌，即制成组织工程角膜的载体支架。