[发明专利]一种大叶藻体细胞胚的诱导方法

摘要

本发明涉及一种大叶藻体细胞胚的诱导方法，是以大叶藻的佛焰苞花序为外植体，将经表面消毒处理的花序切为3‑5mm长的片段，接种到体细胞胚诱导培养基上，在15‑25℃、黑暗或弱光照条件进行诱导培养，每半月转接一次，培养15‑25d以后可见到花序上组织萌动，产生小突起，逐渐发育为体细胞胚，期间不经历愈伤组织阶段。体细胞胚诱导培养基是以MS、N6培养基为基础培养基、并添加有机添加物、碳源、植物激素（生长素、或生长素与细胞分裂素）和海盐的固体培养基。本发明的方法可不经历愈伤组织诱导培养阶段，在短时间内从花序组织上直接诱导出大叶藻体细胞胚，为大叶藻无菌组培苗再生和组培快速繁殖体系的建立提供了重要的技术支撑，也为海草组织培养的成功奠定了基础。

主权项

一种大叶藻体细胞胚的诱导方法，其特征在于包括下列步骤：1)外植体的选取：以大叶藻花枝为外植体供体，取其健康幼嫩佛焰苞花序，经表面除杂、清洗后在超净工作台内进行消毒处理，剥去佛焰苞花序外的苞叶，得到无菌的花序；2)体细胞胚的诱导培养：将无菌花序切成3‑5mm长的外植体片段，接种于培养基中，在15‑25℃、黑暗或弱光条件下进行培养；15‑25d后花序上组织萌动，产生小突起，逐渐发育为体细胞胚，期间不经历愈伤组织阶段；体细胞胚诱导培养基为以MS、N6培养基为基础培养基，添加了琼脂、海盐、水解酪蛋白、蔗糖或葡萄糖和植物激素，其中，琼脂添加量为5‑7g/L，海盐添加量为20‑35g/L，水解酪蛋白添加量为100‑1000mg/L，蔗糖或葡萄糖的添加量为30‑120g/L，植物激素的种类和用量为2,4‑D 5mg/L、或NAA 2mg/L、或IAA10mg/L、或噻苯隆0.2mg/L、或2,4‑D 5mg/L+6‑BA 0.5mg/L，培养基pH＝6‑8。