[发明专利]一种基于太赫兹时域光谱的无标记血凝素蛋白检测方法

摘要

本发明公开一种基于太赫兹时域光谱的无标记血凝素蛋白检测方法，其中，包括步骤a、将样本溶于PBS缓冲液中配制成不同浓度的抗原溶液H9，将单克隆抗体F10与抗原溶液H9等体积比反应得到反应物；b、将反应物置于室温孵育一段时间，然后震荡，并在低温条件下过夜，使抗原抗体复合物结构成型；c、将复合物置于检测盒中，并在太赫兹光束焦斑处垂直置入检测盒中，记录与浓度有关的太赫兹强度吸收光谱；d、根据与浓度有关的太赫兹强度吸收光谱判断是否有吸收峰，当没有时，则检测到样本中含有血凝素蛋白。

主权项

一种基于太赫兹时域光谱的无标记血凝素蛋白检测方法，其特征在于，包括步骤：a、将样本溶于PBS缓冲液中配制成不同浓度的抗原溶液H9，将单克隆抗体F10与抗原溶液H9等体积比反应得到反应物；b、将反应物置于室温孵育一段时间，然后震荡，并在低温条件下过夜，使抗原抗体复合物结构成型；c、将复合物置于检测盒中，并在太赫兹光束焦斑处垂直置入检测盒，记录与浓度有关的太赫兹强度吸收光谱；d、根据与浓度有关的太赫兹强度吸收光谱判断是否有吸收峰，当没有时，则检测到样本中含有血凝素蛋白；所述步骤a中，将样本溶于PBS缓冲液中配制成7.5、15、29、56、113、225以及430μg/ml的浓度梯度；所述过夜时间为12小时；所述步骤c中的检测盒的材料选用TOPASTM5013L‑10；所述步骤a中，单克隆抗体F10以固定浓度230μg/ml与抗原溶液等体积比反应；所述步骤c中，检测盒中的复合物厚度为0.3cm；所述太赫兹光束的频率范围为0.1～1.5THz；所述步骤b中，在室温条件下孵育30分钟；所述步骤c中在记录与浓度有关的太赫兹吸收光谱具体包括：分别多次记录每一组浓度梯度的太赫兹强度吸收光谱，确定太赫兹强度吸收光谱与抗原‑抗体摩尔比的关系，通过透射光强测量，计算折射率n(ω)及吸收系数a(ω)，并取多次平均，由折射率n(ω)与吸收系数a(ω)，根据下述公式(1)(2)，计算介电常数ε(ω)＝ε’+iε”的实部ε’与虚部ε”；ϵ′=n(ω)2-cα(ω)22ω---(1)]]>ϵ′′=2n(ω)(cα(ω)2ω)---(2)]]>由公式tanδ＝ε”/ε’计算得到太赫兹介电损耗角δ，获取太赫兹介电损耗角与抗原‑抗体摩尔比的关系；单克隆抗体F10与抗原溶液H9的最佳反应位点比为1.38:1，最佳抗原浓度为113μg/ml。