[发明专利]一种高效液相色谱-二极管阵列法同时测定水产品中多种ATP关联产物的方法

摘要

本发明属于分析化学领域，公开了一种用高效液相色谱—二极管阵列法同时测定水产品中多种ATP关联产物含量的方法。使用带有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪进行检测，将待测样品提取后进样到高效液相色谱仪中，梯度洗脱；根据各ATP关联产物的保留时间及紫外吸收光谱，确定各色谱峰是哪一种ATP关联产物，检测相应ATP关联产物色谱峰面积，根据同样色谱条件下ATP关联物标准工作曲线或者回归方程计算待测样品提取液中ATP关联产物的含量。本方法的设备及分析条件要求简单，不用离子对试剂也可以同时测定水产品中多种ATP关联产物含量，可同时测10种，分离时间不超过25分钟。

主权项

一种高效液相色谱‑二极管阵列法同时测定水产品中多种ATP关联产物的方法，其特征在于，所测定的ATP关联物为三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、腺苷酸、肌苷酸、次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤、鸟苷酸、腺苷、腺嘌呤和黄嘌呤；包括如下步骤：使用带有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪进行检测，将待测样品提取液加入到高效液相色谱仪中，梯度洗脱；根据各ATP关联产物的保留时间和210～400nm下的紫外吸收光谱，确定各色谱峰是哪一种ATP关联产物；色谱条件为，分析柱：填料选自十八烷基键合相硅胶的通用型液相色谱柱；流速：0.5～1.5mL/min；进样量为8～12μl；柱温为30～35℃；洗脱程序为：第一阶段：A相0％、B相100％；持续时间为5.5～6.5min；第二阶段：瞬时调整为A相7％～9％、B相91％～93％，并以这个百分比洗脱；持续时间为8.5～10min；第三阶段：两种流动相匀速变化到A相32％～40％，B相60％～68％；持续时间为4.5～6min；第四阶段：两种流动相为A相32％～40％，B相60％～68％；持续时间为1.5～3min；第五阶段：两种流动相匀速变化到A相0％、B相100％；持续时间为2.5～4min；上述比例均为体积比；所述流动相由A相的有机溶剂和B相的缓冲液组成；A相为甲醇或乙腈，B相为pH 5.8～6.0、浓度为15～60mmol/L的磷酸氢二钾缓冲液、磷酸二氢钾缓冲液、磷酸氢二钠缓冲液、柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液或乙酸‑乙酸钠缓冲液；所述流动相在使用前用0.22～0.5μm的水相微孔滤膜过滤后，超声脱气3～10分钟；检测相应ATP关联产物色谱峰面积，根据同样色谱条件下ATP关联物标准工作曲线或者回归方程计算待测样品提取液中ATP关联产物的含量。