[发明专利]一种使用硫酸软骨素酶生产硫酸乙酰肝素的工艺

摘要

本发明提供一种使用硫酸软骨素酶生产硫酸乙酰肝素的工艺。首先将肝素钠粗品经过酶解、树脂吸附、氯化钠溶液洗脱得到洗脱物。将洗脱物用硫酸软骨素ABC酶或硫酸软骨素B酶进行酶解。利用这两种酶专一切断硫酸皮肤素结构中二糖单元之间1-4糖苷键的特异性，得到降解反应产物不饱和二糖。之后进行超滤、除重金属、氧化等精制步骤得到硫酸乙酰肝素精品。该法既克服了硫酸乙酰肝素与硫酸皮肤素表面所带负电荷密度相近难分离的特点，又避免了传统路线得到硫酸乙酰肝素所带进的重金属离子杂质，提高了产品收率，有显著的经济效益。

主权项

一种使用硫酸软骨素酶生产硫酸乙酰肝素的工艺，其特征是包括如下制作步骤，浓度按质量百分比：将肝素钠粗品溶于浓度为2％的氯化钠溶液中，采用酶解法酶解，对酶解液用阴离子交换树脂充分吸附；步骤A中的阴离子交换树脂用浓度为3.0%‑6.0%的氯化钠溶液进行洗脱，得到洗脱液经乙醇沉淀烘干得到洗脱物；步骤B中得到的洗脱物溶为10.0%浓度，调节pH值为8.0‑8.5，添加洗脱物重量2.0%‑3.5%的CaCl₂，后添加洗脱物重量3.0%‑4.5%的Na₂CO₃充分搅拌反应，将沉淀过滤除去得到上清液；将步骤C中的上清料液调节pH值为6.0‑7.0，温度20‑40℃，加入硫酸软骨素ABC酶量为：酶/洗脱物=1000‑2000 IU/Kg，搅拌酶解8‑12h；或调节上清料液pH值7.0‑8.5，温度20‑40℃，加入硫酸软骨素B酶量为：酶/洗脱物=1500‑2500 IU/Kg洗脱物，搅拌酶解8‑12h；将酶解液用C步骤再次除蛋白，调pH值至7.0，用3K超滤膜进行超滤3‑4h，取截留液用乙醇1.5‑2.0倍沉淀；将步骤E所得沉淀物用纯化水溶解，加入乙二胺四乙酸EDTA进行搅拌、吸附、过滤，滤液用1.5‑2.0倍药用乙醇沉淀，所得的沉淀物溶解并用双氧水氧化4h；将步骤F所得料液加入1.5‑2.0倍药用乙醇沉淀，弃上清，所得固体沉淀物再用纯化水溶成10%浓度，经0.22微米滤芯过滤，然后真空冷冻干燥，最终得到硫酸乙酰肝素精品。