[发明专利]一种绿色球状体途径的泽泻蕨种苗组培快繁方法

摘要

一种绿色球状体途径的泽泻蕨种苗组培快繁方法，包括诱导培养基：1/6MS～1/4MS+TDZ0.4～1.0mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+水解酪蛋白400～800mg/L；增殖培养基：1/6MS～1/4MS+TDZ0.1～0.3mg/L+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+水解酪蛋白400～800mg/L；分化培养基：1/4MS～1/2MS+活性炭3～6g/L；各培养基加有蔗糖和琼脂，pH为5.80。其绿色球状体诱导率88％以上，增殖倍数11～12.5倍，分化率98％以上，一个绿色球状体一年内可繁出种苗150～200万株，成活率95％以上。

主权项

一种绿色球状体途径的泽泻蕨种苗组培快繁方法，其特征在于步骤如下：(1)泽泻蕨无菌外植体的获得将泽泻蕨无菌孢子接种在1/2MS+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L，pH为5.80的培养基上，培养条件为：20～25℃、每天的光照时间为12小时，光照强度为2000lx，得到幼嫩的无菌苗，以幼嫩无菌苗作为泽泻蕨无菌外植体；(2)泽泻蕨绿色球状体的诱导将步骤(1)获得的泽泻蕨无菌外植体接种于诱导培养基上进行培养，培养条件与步骤(1)相同，无菌苗茎尖和叶柄基部膨大形成原始的绿色球状体即为诱导得到的泽泻蕨绿色球状体；所述的诱导培养基为：1/6MS～1/4MS+TDZ0.4～1.0mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+水解酪蛋白400～800mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L，pH为5.80；(3)泽泻蕨绿色球状体的增殖将步骤(2)诱导得到的泽泻蕨绿色球状体分割为直径2～5mm的球状体，接种于增殖培养基上进行培养，培养条件与步骤(1)相同；所述的增殖培养基为：1/6MS～1/4MS+TDZ0.1～0.3mg/L+6‑BA0.5～1.0mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+水解酪蛋白400～800mg/L+蔗糖30.0g/L，琼脂浓度7.0g/L，pH为5.80；(4)泽泻蕨绿色球状体的分化将步骤(3)增殖后的泽泻蕨绿色球状体分割为直径2～5mm的球状体，接种于分化培养基上进行培养得到分化幼苗，培养条件与步骤(1)相同；所述的分化培养基为：1/4MS～1/2MS+活性炭3～6g/L+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L，pH为5.80；(5)分化幼苗的培养将步骤(4)得到的分化幼苗接种于分化幼苗培养基上进行培养得到组培苗，培养条件与步骤(1)相同；分化幼苗培养基为：MS+活性炭3‑6g/L+蔗糖30.0g/L+琼脂浓度7.0g/L，pH为5.80；(6)组培苗移栽培育待步骤(5)所述组培苗苗高达到2～3cm时，在20～25℃、每天的光照时间为12小时、光照强度2000lx条件，开盖炼苗2～3天，将炼苗后的组培苗除去根部的培养基，并用质量分数为0.1～0.125％百菌清溶液清洗根部，种植于盛有基质的育苗盒内，育苗盒内所用基质为草炭：河沙：珍珠岩的体积比为3:1:1的混合基质，再将育苗盒放置塑料棚里，控制棚内温度为20～25℃，在自然光照下生长10～15天即得泽泻蕨种苗。