[发明专利]一种长效蛋白质药物表达复性修饰的双标签载体及方法

摘要

本发明属于基因工程领域，提供一种长效蛋白质药物表达复性修饰的双标签载体及方法，该方法包括pSumo‑Intein质粒载体的构建、人源SENP2催化域蛋白的制备、pSumo‑目标DNA‑Intein质粒载体构建、pSumo‑目标DNA‑Intein质粒载体在表达宿主菌的表达和复性纯化等步骤，得到目标蛋白。本发明将Sumo和Intein这两种标签整合到同一个表达质粒中，可以同时利用这两种标签的优势，在大肠杆菌中表达时最大程度地免受蛋白酶的降解。本发明可用于大规模低成本地实现实验室规模到工业生产规模蛋白质药物的纯化和复性，高通量蛋白质抗原表达，和已有蛋白质药物的长效化改造。

主权项

一种长效蛋白质药物表达复性修饰的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：pSumo‑Intein质粒载体的构建步骤：将Sumo的标签的DNA序列连接入已酶切掉目标蛋白的N端的Intein的DNA序列的IPTG诱导表达的质粒载体，得到pSumo‑Intein质粒载体；其中，所述Sumo的标签的DNA序列包括SEQ ID No.2；人源SENP2催化域蛋白的制备步骤：将SENP2催化域的DNA序列连接入pGEX4T1质粒载体，得到SENP2‑pGEX4T1质粒载体；再将所述SENP2‑pGEX4T1质粒载体转化入表达宿主菌进行诱导表达处理、收集纯化处理，得到人源SENP2催化域蛋白；其中，所述SENP2催化域的DNA序列包括SEQ ID No.3；目标DNA在pSumo‑Intein系统中的质粒构建步骤：将目标DNA连接入所述pSumo‑Intein质粒载体，得到pSumo‑目标DNA‑Intein质粒载体；pSumo‑目标DNA‑Intein质粒载体在表达宿主菌的表达和复性纯化步骤：将所述pSumo‑目标DNA‑Intein质粒载体转化入表达宿主菌进行诱导表达处理、裂解和消化处理、孵育处理、复性处理、自剪切处理、酶切处理、洗脱处理，得到目标蛋白；其中，所述目标DNA为proinsulin突变体的DNA序列或GLP1类似物exendin‑4突变体的DNA序列；所述proinsulin突变体的DNA序列包括SEQ ID No.4，所述GLP1类似物exendin‑4突变体的DNA序列包括SEQ ID No.5。