[发明专利]一种转基因羊卵母细胞的筛选方法在审
| 申请号： | 201410489943.5 | 申请日： | 2014-09-23 |
| 公开（公告）号： | CN104267011A | 公开（公告）日： | 2015-01-07 |
| 发明（设计）人： | 房义;钟荣珍;周道玮 | 申请（专利权）人： | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 哈尔滨市松花江专利商标事务所 23109 | 代理人： | 侯静 |
| 地址： | 150081 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 一种转基因羊卵母细胞的筛选方法，涉及一种卵母细胞的筛选方法。本发明是要解决现有的转基因羊卵母细胞质量检测方法中存在取材困难，实验周期长的问题。方法：一、对转基因羊和非转基因羊进行超数排卵，收集不同发育时期的卵母细胞；二、用多聚甲醛固定卵母细胞，依次用Triton-100、HCl、BSA封闭液处理；三、将卵母细胞经PBS吹洗，加入一抗，孵育过夜，然后于二抗中孵育，染色，制片，显微镜观察并拍照；四、采用图像分析软件将同一发育时期的转基因羊和非转基因羊的卵母细胞进行荧光强度定量分析比较，选择与非转基因羊相比无显著性差异的转基因羊卵母细胞，即完成转基因羊卵母细胞的筛选。本发明用于筛选转基因羊卵母细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 转基因 羊卵母 细胞 筛选 方法 | ||
【主权项】：
一种转基因羊卵母细胞的筛选方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、采用CIDR+FSH的方法对转基因羊和非转基因羊进行超数排卵，收集不同发育时期的卵母细胞；二、用体积百分浓度为4％的多聚甲醛固定卵母细胞至少30分钟，然后依次用体积百分浓度为1％的Triton‑100处理30分钟、体积百分浓度为1％的HCl处理30分钟、2mg/mL的BSA封闭液封闭30分钟；三、将卵母细胞经PBS吹洗3次，然后加入一抗，4℃孵育过夜，然后于FITC标记的山羊抗小鼠二抗中37℃孵育1.5h，接着于碘化丙碇中室温染色10min，制片，Confocal显微镜观察并拍照；四、采用图像分析软件将同一发育时期的转基因羊和非转基因羊的卵母细胞进行荧光强度定量分析比较，选择每个发育时期都满足与非转基因羊卵母细胞相比荧光强度无显著性差异的转基因羊卵母细胞，即完成转基因羊卵母细胞的筛选。
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