[发明专利]一种高效富集微生物的功能化磁性纳米粒子及制备与应用

摘要

本发明公开一种高效富集微生物的功能化磁性纳米粒子及制备与应用。基于该功能化磁性纳米粒子对食品中的微生物进行高效富集和核酸检测的方法，主要的步骤包括(1)对磁性纳米粒子进行修饰及功能化；(2)在液体环境中对食品中的微生物进行磁富集；(3)对富集到的细菌进行基因组分离、纯化；(4)对分离纯化的细菌基因组进行基于PCR的核酸检测。该方案可在短时间内对食品中的致病性细菌进行高效的富集，并从富集到细菌中分离纯化到高质量的基因组模板，进行核酸检测。相对于传统的方法更加快速，节省了大量的人力、物力，可以对食品中低浓度的致病菌进行有效地检出，检测结果也更为可靠，易于在生产、生活、科研等领域的推广和应用。

主权项

一种高效富集微生物的功能化磁性纳米粒子的制备方法，其特征在于包括如下步骤：通过氨基、羧基脱水缩合作用将万古霉素修饰到氨基磁珠上，再用一端羧基活化的聚乙二醇对磁珠上剩余的氨基位点进行封闭；即得到能高效富集微生物的功能化磁性纳米粒子；所述的氨基磁珠为四氧化三铁磁性纳米微球，表面基团:‑NH2，粒径为100～200nm，浓度为5mg/mL，分散于PBS缓冲液中；所述的氨基、羧基脱水缩合作用的反应步骤及体系如下：1)取氨基磁珠，进行磁富集，加入30mM/pH6的MES缓冲液清洗三次并重悬于30mM/pH6的MES缓冲液中；2)称取万古霉素盐酸盐，N‑羟基琥珀酰亚胺，1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐；3)将步骤1)中的氨基磁珠和步骤2)中的药品均匀混合并加入30mM/pH6的MES缓冲液，得到混合液，反应；4)反应完成后，对磁珠进行磁分离，30mM/pH6的MES缓冲液清洗三次，并重悬于30mM/pH6MES缓冲液中，得到修饰上万古霉素的纳米磁珠；步骤1)中所述的氨基磁珠与步骤2)中所述的万古霉素盐酸盐的体积质量比为(400～425)mL：3g；步骤2)中所述的万古霉素盐酸盐、N‑羟基琥珀酰亚胺和1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐的质量比为3:(5～7):(7～9)；步骤3)中所述的混合液中万古霉素盐酸盐的浓度为3～6g/mL。