[发明专利]一种β-羟基羧酸酯羟基氧化酶的筛选方法

摘要

本发明提供了一种β‑羟基羧酸酯羟基氧化酶的高通量筛选方法，属于生物技术领域。提供了一种利用β‑羟基羧酸酯的氧化产物（β‑羰基羧酸酯类化合物）与金属离子显色液进行显色反应，并在24孔板中建立了β‑羟基羧酸酯（例如，脂肪族和芳香族β‑羰基羧酸酯）的羟基氧化酶的高通量筛选方法。该方法具有操作简单、快速、准确和通量高等特点。

主权项

一种β‑羟基羧酸酯羟基氧化酶的高通量筛选方法，其特征在于按照下述步骤进行：（1）称取湿重的红球菌Rhodococcus sp. CCZU10‑1静息细胞悬浮于磷酸缓冲溶液体系，其中磷酸缓冲溶液体系的pH为7.0，浓度为100 mmol/L；细胞终浓度以质量浓度计为10%；加入终浓度为100 mmol/L的底物外消旋β‑羟基羧酸酯混合均匀后在30℃、160 r/min 的条件下进行氧化转化反应；（2）反应结束，利用等体积乙酸乙酯萃取萃取反应液；显色是在24孔板中进行的；萃取上清液：显色剂A：显色剂B的体积比为20:800:800，其中显色剂A浓度为0.04 ~ 0.08 mol/L，显色剂B浓度为0.1 ~ 0.3 mol/L；在20~35℃下显色反应15~30 min后取200 μL反应液至另一24孔板中，加入9倍体积的无水乙醇混合均匀，用紫外‑可见分光光度计测其在510 nm波长下进行分析；显色剂A为FeCl3、FeCl2、Fe2(SO4)3、FeSO4、Fe(ClO4)3、CoCl2或ZnCl2中的一种；显色剂B为HCl、H2SO4或 HClO4。