[发明专利]饮用水源水中肠道病毒的检测方法

摘要

一种饮用水源水中肠道病毒的检测方法，属于水质检测方法领域。该检测方法，包括以下步骤：（1）水样处理，（2）水样浓缩，（3）细胞培养，（4）病毒检测。本发明所述的检测方法测定水中肠道病毒含量简单易行、准确度高、重复性高、检测极限低，可在环境监测站作为水中肠道病毒含量的测定方法而推广使用。

主权项

饮用水源水中肠道病毒的检测方法，包括以下步骤：（1）水样处理：用无菌采样瓶收集水源水样，将1%体积比的Earle′s平衡液加入水样中以促进病毒的吸附，充分混匀，用1mol/L盐酸调pH为4.5；（2）水样浓缩：将一张直径175mm的滤纸平铺于175mm直径的过滤器网板上，用无菌水浸湿，将滑石粉‑硅藻土混悬液倒在浸湿的滤纸上，加压抽滤，使之形成均匀而平整的薄层，然后盖上两张直径相同的滤纸，将处理好的水样加到吸附层上加压过滤，待水样全部通过吸附层后，用30mL的3%牛肉浸膏洗脱液洗脱吸附层上的病毒，抽滤，收集洗脱液，用1mol/L盐酸调pH至7.2左右，用0.22μm 的微孔滤膜抽滤除菌，得到水样浓缩液，置4℃冰箱待用；（3）细胞培养：将长成单层的Hela细胞生长液倒掉，加入适量的EDTA‑胰酶消化液消化，加入适量的生长液，用吸管吹打分散细胞，再用生长液稀释并分装于细胞培养瓶中，37℃培养；（4）病毒检测：细胞成片后，弃去生长液，加水样浓缩液，37℃吸附1‑2小时，每隔15分钟振荡一次；将接种过的细胞倒掉水样液，加适量的46℃‑47℃营养琼脂平铺待凝，凝固后37℃翻转培养48小时，然后用甲醛液固定20分钟，甩掉琼脂，自来水冲洗干净，再加入结晶紫染色20分钟，自来水冲洗，观察空斑并计数，设一瓶空白对照，即细胞不经接种做空斑试验；通过空斑数量计算病毒浓度。