[发明专利]用于rs8099917单核苷酸多态性的直接荧光PCR检测试剂盒及应用

摘要

本发明公开了一种用于rs8099917单核苷酸多态性的直接荧光PCR检测试剂盒及应用，所述试剂盒包括检测PCR试剂、阳性对照PCR试剂和阴性对照PCR试剂，所述检测PCR试剂包括单核苷酸多态性rs8099917位点的特异性引物1和引物2、探针1和PCR Mixture1；本发明将人口腔拭子样本或人外周血样本直接作为模板，加入优化的PCR反应体系中进行检测，过程一步完成，无需开盖，既能减少实验操作步骤，节省时间，同时还避免了开盖操作可能带来的样本污染。

主权项

一种用于rs8099917单核苷酸多态性的直接荧光PCR检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括检测PCR试剂、阳性对照PCR试剂和阴性对照PCR试剂，所述检测PCR试剂包括单核苷酸多态性rs8099917位点的特异性引物1和引物2、探针1和PCR Mixture1；所述阳性对照PCR试剂包括阳性质控品、引物3、引物4、TaqMan探针2和PCR Mixture2，所述阳性质控品为rs8099917位点野生型和突变型质粒混合液；所述阴性对照PCR试剂包括阴性质控品、引物5、引物6、TaqMan探针3和PCR Mixture3，所述阴性质控品为rs8099917位点野生型质粒溶液；所述PCR Mixture1包括PCR缓冲液、dNTPs、BSA、MgCl2、Taq 22B DNA聚合酶和双蒸水，所述PCR Mixture2和PCR Mixture3的组成同PCR Mixture1；引物1、引物3和引物5均为：5’‑ACATACAACATGGAGAGTTAAAG‑3'；引物2和引物6均为：5’‑TGGTTCCAATTTGGGTGgC‑3'；引物4为：5’‑TGGTTCCAATTTGGGTGgA‑3'；TaqMan探针1、TaqMan探针2和TaqMan探针3均为：5’‑FAM‑AAGTCTTGTATTTCACCTCCTGGAGG‑BHQl‑3’；野生型质粒的序列为：GTTCCTTGTAAAAGATTCCATCCATACAAAAACATACAACATGGAGAGTTAAAGTAAGTCTTGTATTTCACCTCCTGGAGGTAAATATTTTTTAACAATTTGTCACTGTTCCTCCTTTTGTTTTCCTTTCTGTGAGCAATTTCACCCAAATTGGAACCATGCTGTATACAGTTTGGTAGCTGGCTTTTTATGTCTTACCATTATCTCTCATTTGCATTCTCCCACATCTTTAATTATAGCGTATCAGTTAGGGCCCAGCAGGAAACAGATGGCCCGTCAATTTAGGATAATTTGAGGTGGGGTTGATACCAGAAGCCTTTA；突变型质粒的序列为：GTTCCTTGTAAAAGATTCCATCCATACAAAAACATACAACATGGAGAGTTAAAGTAAGTCTTGTATTTCACCTCCTGGAGGTAAATATTTTTTAACAATT TGTCACTGTTCCTCCTTTTGTTTTCCTTTCTGTGAGCAATGTCACCCAAATTGGAACCATGCTGTATACAGTTTGGTAGCTGGCTTTTTATGTCTTACCATTATCTCTCATTTGCATTCTCCCACATCTTTAATTATAGCGTATCAGTTAGGGCCCAGCAGGAAACAGATGGCCCGTCAATTTAGGATAATTTGAGGTGGGGTTGATACCAGAAGCCTTTA。