[发明专利]一种基因编码的过氧化氢荧光探针及其制备方法和应用

摘要

本发明提供一种基因编码的过氧化氢荧光探针和制备方法及其应用，包括对H₂O₂敏感的多肽OxyR和对H₂O₂进行表现的荧光蛋白cpYFP，将荧光蛋白cpYFP插入到对H₂O₂敏感的多肽OxyR中，形成荧光探针，其特征在于：所述过氧化氢荧光探针为对荧光探针中的荧光蛋白cpYFP序列进行突变而得到的突变体。该基因编码的H₂O₂荧光探针可以在活菌、亚细胞水平检测H₂O₂；探针特异性非常好，对H₂O₂具有选择性，且对H₂O₂的动态响应变化没有因为突变位点的引入而受影响。

主权项

1.一种基因编码的过氧化氢荧光探针，包括SEQ ID NO:34所示对H2O2敏感的多肽OxyR和SEQ ID NO:6所示对H2O2进行表现的荧光蛋白cpYFP，将荧光蛋白cpYFP插入到对H2O2敏感的多肽OxyR中，形成荧光探针，其特征在于：所述过氧化氢荧光探针为对荧光探针中的荧光蛋白cpYFP序列进行突变而得到的突变体；所述过氧化氢荧光探针为对SEQ ID NO：2所示的HyPer荧光探针的S262R、Y271N、Y131F和N337T位点中的1个或1个以上位点进行突变的突变体；所述过氧化氢荧光探针为HyPer‑N337T,Y131F,Y271N、HyPer‑N337T,Y131F,S262R,Y271N、HyPer‑N337T或HyPer‑N337T,Y131F；或者所述过氧化氢荧光探针为对SEQ ID NO：4所示的HyPer3荧光探针的S262R、Y271N、Y131F和N337T位点中的1个或1个以上位点进行突变的突变体；所述HyPer3荧光探针为HyPer荧光探针的H34Y位的突变体；所述过氧化氢荧光探针为HyPer3‑N337T,Y131F,S262R、HyPer3‑N337T,Y131F,Y271N或HyPer3‑N337T,Y131F,S262R,Y271N。