[发明专利]一种海葵多糖的制备方法及其抗肿瘤应用

摘要

本发明公开了一种海葵多糖的制备方法，采用恒温高速剪切法破碎原料，经水浸提、分30％、60％、80％三级醇沉、然后用木瓜蛋白酶酶解、sevag脱蛋白，制得三种糖含量较高的海葵多糖，本发明制得的三种海葵多糖可用于制备抗肿瘤药物，具体可用于制备抗肺癌、抗前列腺癌或腹水瘤药物。

主权项

一种海葵多糖的制备方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：(1)将新鲜海葵外表清洗干净，剪开，洗去其腔肠内含物质后剪碎，所得碎海葵经匀浆剪切10‑20min，所得匀浆液中加入体积为匀浆液体积4‑10倍的水，所得混合液在30‑70℃浸提2‑4h，所得提取液离心，取上清液A浓缩至原体积的1/4，得到浓缩液A，(2)浓缩液A中加入体积分数95％乙醇，使所得醇提混合液I中乙醇的体积分数为30％，4℃环境中放置4‑8h，离心、分离得到沉淀I和上清液I，向上清液I中加入体积分数95％乙醇，使所得醇提混合液II中乙醇的体积分数为60％，4℃环境中放置4‑8h，离心、分离得到沉淀II和上清液II，向上清液II中加入体积分数95％乙醇，使所得醇提混合液III中乙醇的体积分数为80％，4℃环境中放置4‑8h，离心、分离得到沉淀III；(3)将沉淀I、II和III分别溶于水，加木瓜蛋白酶，在pH5‑6、温度30‑70℃条件下酶解1‑4h，所述木瓜蛋白酶的质量用量为沉淀I、II或III重量的0.1‑1％，酶解完成后煮沸灭酶，分别得到酶解液I、酶解II、酶解液III；(4)(4a)向酶解液I中加入其体积三分之一的Sevag试剂，所述Sevag试剂是将正丁醇和氯仿按体积比1:4混合制成，搅拌30～60min，离心除去析出的变性蛋白，取上清液B按照上述步骤重复操作3‑5次，最后得到的上清液C减压浓缩，得浓缩液C，真空冷冻干燥制得海葵多糖I；(4b)酶解液II、III按照上述步骤(4a)进行同样操作，分别制得海葵多糖II和海葵多糖III。