[发明专利]一种红腺悬钩子组织培养与快速繁殖的方法

摘要

本发明公开了一种红腺悬钩子组织培养与快速繁殖的方法，包括以下步骤：（1）红腺悬钩子的消毒和接种；当年11月至次年3月之间，剪取带腋芽的茎段接种到WPM基本培养基中；（2）丛生芽的诱导；（3）不定芽的增殖；（4）再生植株的生根培养；（5）炼苗移栽：待生根的组培苗的苗高长至5cm以上，根长超过5cm时，拿出再生植株，将植株定植于珍珠岩、泥炭的混合基质中，适应3-5d后即可移栽大田中。采用本发明的方法，能够快速地获得红腺悬钩子植株，利于产业化生产。采用本发明方法，红腺悬钩子丛生芽的诱导率高达95%，不定芽增殖率可达8.6，植株生根率、移栽成活率可达95%以上。

主权项

一种红腺悬钩子组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）红腺悬钩子的消毒和接种当年11月至次年3月之间，剪取带腋芽的茎段，先用牙刷于自来水下轻柔刷洗，加入适量的洗洁精溶液浸泡2‑4 min，用流水冲洗0.5 h后，在超净台里将茎段转入70%的酒精溶液中浸泡2 min，用无菌水冲洗3次，浸入滴加有5滴吐温‑80的0.1% HgCl₂溶液内浸泡消毒12‑17 min，然后用无菌水充分浸洗3次，以正常的极性方向接种到添加有TDZ 0.5 mg/L，6‑BA 2.0 mg/L的WPM基本培养基中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为7 g/L， pH为5.8‑6.0，培养基曾于121℃下高温高压灭菌20 min；接好外植体的培养基先置于黑暗中10 h，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(25±1)℃，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30‑40 μmol/(m²·s)；（2）丛生芽的诱导当年11月至次年3月之间，剪取带腋芽的茎段，先用牙刷于自来水下轻柔刷洗，加入适量的洗洁精溶液浸泡2‑4 min，用流水冲洗0.5 h后，在超净台里将茎段转入70%的酒精溶液中浸泡2 min，用无菌水冲洗3次，浸入滴加有5滴吐温‑80的0.1% HgCl₂溶液内浸泡消毒14‑15 min，然后用无菌水充分浸洗3次，以正常的极性方向接种到添加有TDZ 0‑2.0 mg/L，6‑BA 0‑5.0 mg/L ，IAA 0‑5.0 mg/L，CH 0‑1.0 mg/L的WPM基本培养基中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为7.0 g/L， pH为5.8‑6.0，培养基曾于121℃下高温高压灭菌20 min；接好外植体的培养基先置于黑暗中10 h，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(25±1)℃，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30‑40 μmol/(m²·s)；（3）不定芽的增殖将上一步诱导获得的不定芽丛从茎段中分离，然后切成2‑3株不定芽的芽块，接种到添加有TDZ 0‑2.0 mg/L，6‑BA 0‑5.0mg/L ，IAA 0‑5.0 mg/L，CH 0‑1.0 mg/L的WPM基本培养基中进行培养，培养条件为：培养温度为(25±1)℃，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30‑40 μmol/(m²·s)；（4）再生植株的生根培养切取叶片嫩绿、生长旺盛且2~3 cm高的不定芽，插入到12.5%‑100% WPM，NAA 0‑1.0 mg/L ，IAA 0‑2.0 mg/L，AC 0‑2.0 mg的生根培养基中；（5）炼苗移栽待生根的组培苗的苗高长至5 cm以上，根长超过5 cm时，松开组培瓶的瓶盖，往瓶中注入少量清水，防止培养基干裂，但先不移开瓶盖，12 h后半挪开瓶盖，再过12 h，移走瓶盖，让灯光直照再生植株培养2 d；然后小心地将培养基捣碎，拿出再生植株，用水小心将残留的琼脂洗净，将植株定植于珍珠岩、泥炭重量比为 1：（1‑5）的混合基质中，浇透水并用透明的聚乙烯塑料薄膜覆盖以保温保湿，室内温度控制在24‑28℃之间；待新叶长出，即可揭开薄膜并叶面喷雾保持湿润，适应3‑5 d后即可移栽大田中。