[发明专利]垂穗披碱草幼穗离体培养再生植株方法

摘要

本发明主要涉及一种垂穗披碱草组织培养再生技术，属于生物技术领域。一种垂穗披碱草幼穗离体培养再生植株方法，其主要特点在于包括以下步骤：1)外植体的获取；2)愈伤组织诱导；3)将诱导的愈伤组织接种于继代培养基中进行培养；4)将步骤3)的垂穗披碱草愈伤组织转移至分化培养基中培养；5)待愈伤组织有绿芽长出，将其转移至生根成苗培养基上进行培养；6)待有5条以上健壮根长出，将三角瓶上的封口膜去掉，同时加入5mL的蒸馏水，炼苗3d，然后将小植株从三角瓶中取出，洗净根部的培养基，最后移栽于混有草炭土和蛭石比例为1:1的花盆中。本发明克服了现有的禾本科牧草组织培养技术过程中常见到的污染率高、愈伤诱导率低和再生性差等问题。

主权项

一种垂穗披碱草幼穗离体培养再生植株方法，其特征在于包括以下步骤：1)外植体的获取：取处于雌雄蕊分化期、长度约为3.0‑10cm的幼穗，剪取垂穗披碱草植株上半部，去掉外层的叶片后在无菌条件下用棉球蘸取70％乙醇擦拭其茎秆和叶鞘，用消过毒的镊子小心剥取幼穗，将其切成2‑3mm的小段；2)愈伤组织诱导：将外植体接种于愈伤诱导培养基上，每皿接种幼穗小段，放入培养室培养，培养室温度为24‑26℃，光照时间16h/d，黑暗时间8h/d，培养时间为1‑2个月；3)将诱导的愈伤组织接种于继代培养基中进行培养，培养室温度为24‑26℃，光照时间16h/d，黑暗时间8h/d，在继代培养基中培养20‑30d；4)将步骤3)的垂穗披碱草愈伤组织转移至分化培养基中培养，培养室温度为24‑26℃，光照时间16h/d，黑暗时间8h/d，在分化培养基中培养的时间为20‑30d；5)待愈伤组织有绿芽长出，将其转移至生根成苗培养基上进行培养，培养室温度为24‑26℃，光照时间16h/d，黑暗时间8h/d；6)待有5条以上健壮根长出，将三角瓶上的封口膜去掉，同时加入5mL的蒸馏水，炼苗3d，然后将小植株从三角瓶中取出，洗净根部的培养基，最后移栽于混有草炭土和蛭石比例为1:1的花盆中，最初3d给幼苗遮上塑料薄膜以保持湿度。