[发明专利]同时诱导扩增Vα24+iNKT细胞和CD3‑CD56+NK细胞的方法

摘要

本发明公开了一种同时诱导扩增Vα24+iNKT细胞和CD3‑CD56+NK细胞的方法，步骤如下外周血分离PBMC，用含自体血浆的无血清培养基将PBMC浓度调整为2×106/ml，加入Anti‑CD16抗体、‑GalCer、IL‑2、IL‑18、IL‑21后转入培养瓶中培养，24小时后往细胞悬液加入Anti‑CD3抗体，根据细胞的生长情况，每隔2天补充IL‑2、IL‑18、IL‑21的无血清培养基，将细胞浓度控制在1.5×106/ml，持续培养14～21天后，即可同时获得大量较高纯度的Vα24+iNKT细胞和CD3‑CD56+NK细胞，细胞数量能达到临床用于肿瘤过继性细胞免疫治疗所需细胞数量的有效值。本发明简便、有效。

主权项

一种同时诱导扩增Vα24+iNKT细胞和CD3‑CD56+NK细胞的方法，其特征在于，步骤为：第0天，取外周血，用淋巴细胞分离液分离出PBMC，将分离得到的PBMC用第一培养基调整PBMC浓度为2×106/mL,制成PBMC细胞悬液，然后往PBMC细胞悬液加入终浓度为500ng/mL的Anti‑CD16抗体、终浓度为500ng的α‑GalCer、终浓度为1000U/mL的IL‑2、终浓度为15ng/mL的IL‑18和终浓度为20ng/mL的IL‑21，之后转入培养瓶中于37℃、5％CO2、100％湿度条件下开始培养，所述第一培养基为含自体血浆的无血清培养基；第1天，细胞培养24小时后加入50ng/mL的Anti‑CD3抗体，在37℃、5％CO2、100％湿度条件下培养；第3天，在细胞培养液中补加一半体积的第二培养基，所述第二培养基为含5体积％的自体血浆、终浓度为1000U/mL的IL‑2、终浓度为15ng/mL的IL‑18、终浓度为20ng/mL的IL‑21的无血清培养基；第5天，离心收集细胞，并用含5体积％的自体血浆、终浓度为1000U/mL的IL‑2、终浓度为15ng/mL的IL‑18、终浓度为20ng/mL的IL‑21的无血清培养基将细胞重悬并调整细胞浓度至1.5×106/mL，转移至G‑REX 100L细胞培养装置中；继续培养和收获：以后每隔2天取样计数细胞，根据计数结果往所述细胞培养装置中补充含5体积％的自体血浆、终浓度为1000U/mL的IL‑2、终浓度为15ng/mL的IL‑18、终浓度为20ng/mL的IL‑21的无血清培养基，调整细胞密度为1.5×106/mL，37℃、5％CO2、100％湿度条件下连续培养至14～21天后，离心收集获得的Vα24+iNKT细胞和CD3‑CD56+NK细胞。