[发明专利]一种分离可代谢粗榧生物碱菌株的方法

摘要

本发明属于植物内生菌分离与微生物发酵工程领域，具体涉及一种分离可代谢粗榧生物碱菌株的方法。通过选取多年生粗榧的根、茎、叶作为外植体，经切条、灭菌后放入培养基中培养使其长出粗榧共生菌，然后对粗榧共生菌按照菌种不同进行分离并分别培养发酵，将发酵液浓缩后进行检测以确定其是否为可代谢粗榧生物碱菌株。本发明在发酵液的制备过程中待菌种产生代谢生物后再接入第二批菌种，利用前批菌种产生的代谢产物为第二批菌种提供营养物质，大大促进了第二批菌种的生长，同时提高了其生物活性，从而产生大量发酵液，在便于菌种筛选的同时提高其准确性。

主权项

一种分离可代谢粗榧生物碱菌株的方法，选取多年生粗榧的根、茎、叶作为外植体，经切条、灭菌后放入培养基中培养使其长出粗榧共生菌，然后对粗榧共生菌按照菌种不同进行分离并分别培养发酵，将发酵液浓缩后进行检测以确定其是否为可代谢粗榧生物碱菌株，其特征在于：所述培养发酵的具体操作方法为将粗榧共生菌活化后放入温度为26℃的环境中培养48h，根据不同菌种的菌落特征鉴定出各菌种，再将各菌种分别接种到装有PDA培养基的培养皿上培养，待菌种产生代谢生物1‑2天后接入第二批菌种，以促进第二批菌种的生长，第二批接种的菌种长出后接种到装有发酵培养基的摇瓶内，然后把摇瓶放入转速为200r/min、温度为28⁰C的摇床上培养5d，收集各菌种的发酵液即可；所述发酵液浓缩的具体操作方法为将各菌种的发酵液分别放入转速为10000r/min的冷冻高速离心机中离心，收集上清液，把上清液放入转速为10000r/min的冷冻高速离心机中再次离心，然后把再次离心后的上清液放入温度为40‑50℃、压强为0.05Mpa的旋转蒸发仪中浓缩至原体积的十分之一，再将各菌种的浓缩液分别放入温度为4℃的冰箱内即可。