[发明专利]一种姬松茸菌种液氮保藏方法

摘要

本发明属于姬松茸领域，更涉及一种姬松茸菌种液氮保藏的方法。该方法通过将姬松茸接种于M3培养基培养，10~12wt%甘油作为姬松茸菌种液氮保藏的保护剂，采用如下降温程序在常温下以4℃/min降至4℃，再以1℃/min降到‑40℃，后放入液氮罐中保存，30℃恒温水浴锅解冻。本发明申请人从培养基筛选、培养基条件、液氮降温程序等因素进行优化，寻找一种适合姬松茸菌种液氮保藏的方法，为姬松茸的科学研究与生产应用提供菌种保障。姬松茸菌种在这种保藏方法下，存活率达100%，且生长速度快，菌丝生长旺盛，其活力也高，不易发生变异，可长期保藏，避免为保持其存活需要定期转接而发生菌种污染、活力降低等不利因素。

主权项

一种姬松茸菌种液氮保藏方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）将姬松茸接种于M3培养基，正面放置于27～30℃恒温生化培养箱，培养8～10d；（2）在无菌操作环境下，取新鲜菌块于灭菌的安培管，注入灭菌过的10~12wt%甘油，没过菌块，常温静置2.5～3.0h；（3）把安培管放入程序降温仪，采用如下降温程序：在常温下以4℃/min降至4℃，再以1℃/min降到‑40℃，后放入液氮罐中保存；（4）启用液氮罐中保存的菌种时，将安培管迅速从液氮罐中取出，放入30℃恒温水浴锅，解冻5min，接种于M3培养基；所述M3培养基：马铃薯150～180g/L，玉米粉75～100g/L，蔗糖18～20g/L，蛋白胨2.0～3.0g/L，KH2PO4 1.8～2.0g/L，MgSO4 0.8～1.0g/L，VB1 10mg/L，琼脂条23～25g/L，pH值自然；M3培养基的配制：将马铃薯去皮切成小块，加1L的蒸馏水，煮沸浸提，过滤，取滤液，接着加入玉米粉，煮沸浸提，过滤，取滤液，再加入琼脂条溶解，最后加入蔗糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4、VB1溶解，用蒸馏水补足至1L。