[发明专利]基于金属增强发光及纳米粒子标记放大的双增强化学发光免疫分析法

摘要

本发明公开了基于金属增强发光及纳米粒子标记放大的双增强化学发光免疫分析法。本发明基于金属增强发光及纳米粒子标记放大的双增强化学发光免疫分析法，以金属纳米粒子代替常规的聚苯乙烯纳米微球，并在距金属纳米粒子表面5～20nm的隔离层表面标记发光物质，致敏金属纳米粒子上发光物质的化学发光耦合到金属纳米粒子表面的等离子体波中，产生共振后，以更强的光强和更快的衰变速度的形式再发射出去，在传统的化学发光免疫分析技术基础上有机地整合了金属增强发光的技术以及纳米粒子的标记放大技术。使得本发明具有灵敏度高，检测速度快等优势。

主权项

基于金属增强发光及纳米粒子标记放大的双增强化学发光免疫分析法，其特征在于包括(I)夹心法：利用有机大分子或无机材料在金属纳米粒子表面形成5～20nm隔离层，将能够与待测样本中的目标分析物特异性结合的探测分子连接到金属纳米粒子或隔离层表面，再标记上发光物质，形成发光物质距离金属纳米粒子表面的距离为5～20nm具有放大标记效果的致敏金属纳米粒子；将能够与待测样本中的目标分析物特异性结合的捕获分子直接或者间接包被在固相载体上；将固相载体、致敏金属纳米粒子以及待测样本混合，形成固相载体‐捕获分子‐目标分析物‐致敏金属纳米粒子免疫复合物；经清洗分离出固相载体复合物后，加入激发物，致敏金属纳米粒子上发光物质的化学发光耦合到金属纳米粒子表面的等离子体波中，产生共振后，以更强的光强和更快的衰变速度的形式再发射出去，最后用化学发光检测仪检测发光强度计算待测样本中的目标分析物的浓度；或者，(II)竞争法：利用有机大分子或无机材料在金属纳米粒子表面形成5～20nm隔离层，将能够与待测样本中的目标分析物竞争结合捕获分子的探测分子连接到金属纳米粒子或隔离层表面，再标记上发光物质，形成发光物质距离金属纳米粒子表面的距离为5～20nm具有放大标记效果的致敏金属纳米粒子；将定量的能够与待测样本中的目标分析物特异性结合的捕获分子直接或者间接包被在固相载体上，将致敏金属纳米粒子待测样本及固相载体混合，探测分子与目标分析物将竞争结合固相载体上的捕获分子，形成固相载体‐捕获分子‐目标分析物和/或固相载体‐捕获分子‐致敏金属纳米粒子免疫复合物；经清洗分离出固相载体复合物后，加入激发物，致敏金属纳米粒子上发光物质的化学发光耦合到金属纳米粒子表面的等离子体波中，产生共振后，以更强的光强和更快的衰变速度的形式再发射出去，最后用化学发光检测仪检测发光强度，计算与致敏金属纳米粒子免疫复合物结合的捕获分子的浓度，从而进一步计算出待测样本中的目标分析物的浓度；或者是利用有机大分子或无机材料在金属纳米粒子表面形成5～20nm隔离层，将能够与待测样本中目标分析物特异性结合的定量的探测分子连接在金属纳米粒子或隔离层表面，再标记上发光物质，形成发光物质距离金属纳米粒子表面的距离为5～20nm具有放大标记效果的致敏金属纳米粒子；将能够与待测样本中的目标分析物竞争结合探测分子的捕获分子直接或者间接包被在固相载体上，将固相载体致敏金属纳米粒子以及待测样本混合，固相载体上的捕获分子与目标分析物将竞争结合致敏金属纳米粒子上的探测分子，形成致敏金属纳米粒子‐目标分析物和/或固相载体‐捕获分子‐致敏金属纳米粒子；经清洗分离出固相载体复合物后，加入激发物，致敏金属纳米粒子上发光物质的化学发光耦合到金属纳米粒子表面的等离子体波中，产生一定程度的共振后，以更强的光强和更快的衰变速度的形式再发射出去，最后用化学发光检测仪检测发光强度计算与固相载体上的捕获分子结合的探测分子的浓度，从而进一步计算出待测样本中的目标分析物的浓度。