[发明专利]一种甲醇营养型酵母的蛋白诱导方法

摘要

本发明涉及一种甲醇营养型酵母的蛋白诱导方法，所述方法包括首先进行酵母前培养，至发酵液中菌体的OD600达到80‑150时，添加混合诱导剂进行诱导培养；其中，以体积份计，所述混合诱导剂的组成成分包括甲醇5‑9份，酵母发酵培养基1‑5份。本发明所提供诱导的方法，能够促进酵母的生长，使得收获菌体密度升高，在原有基础上大大提高目的蛋白的产量。菌液密度和蛋白收获量均较传统工艺提高了10％以上；而且蛋白的活性与原有纯化工艺得到的蛋白无异，免疫原性较高。

主权项

一种甲醇营养型酵母的蛋白诱导方法，其特征在于，所述方法包括：1)取一支液氮中冻存的血清型为adw，基因型为A2的汉逊酵母工作种子1ml，该种子为已鉴定成功的重组乙肝表面抗原工程菌株，按照2％的接种比例，接种至一级培养基中，37℃摇瓶震荡培养至OD600至12；其中，所述一级培养基组成：每升汉逊酵母一级培养基中包含酵母氮源YNB 1.34％，甘油1％；将一级摇瓶中的培养菌液按照2％的接种比例，转接至二级培养基中，37℃摇瓶震荡培养至OD600至12；其中，所述汉逊酵母二级培养基每升组成：甘油30g，磷酸二氢钾2.5g，磷酸二氢铵5.0g，硫酸镁2.5g，氯化钾1.15g氯化钠0.25g，硫酸亚铵0.05g，硫酸铜4mg，硫酸锌15mg，硫酸锰20mg，Na‑EDTA 0.05g，硼酸0.25mg，硫酸镍0.5mg，氯化钴0.5mg，钼酸钠0.5mg，碘化钾0.5mg，维生素B1 0.05mg，维生素D 0.15mg，氯化钙0.375mg；3)将二级摇瓶中的培养菌液按照2％的接种比例，转接至含有培养基的发酵罐中发酵培养，发酵过程中根据溶氧添加甘油，控制含氧量不低于20％，37℃培养至OD600至130；4)至发酵液中菌体的OD600达到130时，停止添加甘油，改为添加混合诱导剂至发酵罐中，混合诱导剂的添加计量为相对于每升发酵液，每小时添加4mL，并控制溶氧至20～40％，进行诱导培养；其中，以体积份计，所述混合诱导剂的组成成分包括：甲醇3份，酵母发酵培养基1份；其中，所述发酵培养基每升组成：甘油10g，磷酸二氢钾5.0g，磷酸二氢铵10g，硫酸镁5g，氯化钾2.3g，氯化钠0.5g，硫酸亚铵 0.1g，硫酸铜8mg，硫酸锌30mg，硫酸锰40mg，N‑EDTA 0.1g，硼酸0.5mg，硫酸镍1mg，氯化钴1mg，钼酸钠1mg，碘化钾1mg，维生素B10.1mg，维生素D 0.3mg，氯化钙0.65mg；5)诱导培养90h，OD600达到200时停止培养，收获发酵液。