[发明专利]一种快速检测花生过敏原Arah2的胶体金试纸条及其制备方法

摘要

一种快速检测花生过敏原Ara h 2的胶体金试纸条及其制备方法，属于免疫检测技术领域。本发明应用的抗体是利用从花生粗蛋白中提取纯化的Ara h 2免疫雌性BALB/c小鼠得到的高特异性的单克隆抗体。由于采用的是单克隆抗体，稳定性和特异性较好，适用于花生过敏原Ara h 2的快速检测。

主权项

一种快速检测花生过敏原Ara h 2的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于步骤为：A：胶体金的制备：采用柠檬酸盐还原法用柠檬酸三钠还原剂将氯金酸还原制成20nm‑40nm胶体金溶液；B：抗Ara h 2抗体‑胶体金标记物的制备：取步骤A中制备的胶体金溶液，每1mL中加入4μL 0.1M K2CO3调节pH至6，搅拌中滴加150μL 0.2mg/mL抗体Ara h 2‑mAb‑5，继续搅拌30min，离心，吸取上清，用金标抗体重悬液重悬；金标抗体重悬液为pH 8.2的含10%蔗糖，0.05% Tween‑20，1% BSA，0.2% PEG20000, 1% PVP‑K30的0.05M Tris‑HCl 溶液；C：胶体金结合垫的制备：调试三维平面点膜喷金仪仪器HM3055，将标记好胶体金的抗Ara h 2抗体Ara h 2‑mAb‑5均匀的喷在玻璃纤维膜上，喷液量0.6pL/cm，37℃烘干过夜，封袋备用；D：硝酸纤维素膜检测层的制备：调试三维平面点膜喷金仪仪器HM3055，将稀释好的抗Ara h 2抗体Ara h 2‑mAb‑1均匀喷在硝酸纤维素膜上，得到检测线；将稀释好的羊抗鼠IgG均匀喷在硝酸纤维素膜上，得到质控线，喷液量为0.6pL/cm，37℃烘干过夜，封袋备用；E：试纸条的组装：将样品垫，胶体金结合垫，硝酸纤维素膜，吸水垫由一端依次粘贴在PVC底板上，即得到用于检测花生过敏原Ara h 2的免疫胶体金层析试纸条；用作金标抗体的一株单克隆细胞株，为细胞株S号，株号为Ara h 2‑mAb‑5，为特异性Ara h 2特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，登记编号为CGMCC No.9314；用作检测抗体的一株单克隆细胞株，为细胞株T号，株号为Ara h 2‑mAb‑1，为特异性Ara h 2特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，登记编号为CGMCC No.9315。