[发明专利]一种同时检测猪肺炎支原体、猪多杀性巴氏杆菌的二重PCR方法在审
| 申请号： | 201410578806.9 | 申请日： | 2014-10-24 |
| 公开（公告）号： | CN104313154A | 公开（公告）日： | 2015-01-28 |
| 发明（设计）人： | 朱建国;韩少鹏 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/35;C12R1/01 |
| 代理公司： | 上海新天专利代理有限公司 31213 | 代理人： | 张宁展 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，具体为一种同时检测猪肺炎支原体、猪多杀性巴氏杆菌的二重PCR方法。其首先分别筛选出具有两个病原体基因型特点的保守性基因片段，作为PCR检测的两个基因靶点，分别合成扩增这些靶点基因的引物；之后将筛选到的2个基因片段的2对引物放在一个PCR反应体系,通过对退火温度、特异性等各项参数调整优化，建立直接从样品中一次检测二种病原体的二重PCR检测方法。该方法体系一方面不但可以准确检测病原体，还可以对混合感染状况进行分析,从而掌握其疫情流行发展趋势，起到一箭双雕的效果。另一方面，本发明较常规PCR方法缩短了24小时的检测时间，达到了快速检测实际样品的目的。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 同时 检测 肺炎 支原体 猪多杀性巴氏 杆菌 二重 pcr 方法 | ||
【主权项】：
一种同时检测猪肺炎支原体、猪多杀性巴氏杆菌的二重PCR方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)首先筛选出猪肺炎支原体、猪多杀性巴氏杆菌的保守性基因片断作为PCR检测靶点，合成扩增这些靶点基因的引物；(2)将2对引物置于一个PCR反应体系中，扩增猪肺炎支原体、猪多杀性巴氏杆菌的保守性基因片断；(3)通过琼脂糖凝胶电泳检测鉴定PCR扩增产物；其中：扩增猪肺炎支原体目的片段的上游引物的序列如SEQ ID NO.1所示；下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示；扩增猪多杀性巴氏杆菌目的片段的上游引物的序列如SEQ ID NO.3所示；下游引物的序列如SEQ ID NO.4所示。
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