[发明专利]基于磁珠法提取土壤微生物DNA的试剂盒及方法

摘要

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种基于磁珠法提取土壤微生物DNA的试剂盒及方法，本发明的基于磁珠法提取土壤微生物DNA的试剂盒及方法，是利用氢氧化铝来去除土壤中的各种杂质，再使用玻璃珠破碎土壤微生物细胞后，通过磁珠吸附土壤微生物DNA，从而快速获得土壤微生物DNA。本发明方法所用时间短，步骤少，能获得纯度高的土壤微生物DNA，无需再进一步纯化即可直接进行下游实验。

主权项

一种基于磁珠法提取土壤微生物DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：土壤样品的前处理：取0.25‑1g的土壤于2ml的离心管中，加入50‑150μl Buffer A，300‑900μl无菌水，300‑900μl Buffer B，涡旋震荡30‑60s，加入50‑150μl Buffer C，200‑400μl Buffer D，涡旋震荡30‑60s，8000‑10000g离心2‑5min，去上清得沉淀A；所述Buffer A为pH为4‑6的0.5‑2M的Tris‑Cl缓冲液；所述Buffer B为0.1‑2M为包含0.1‑2M的Al³⁺离子的溶液；所述Buffer C为包含2‑6M的OH^‑离子的溶液；所述Buffer D为pH＝7‑9的0.1‑1M的Tris‑Cl缓冲液；土壤微生物DNA的提取：所述沉淀A加入300‑400μl Buffer D，0.2‑1g的0.5mm玻璃珠，300‑400μl Buffer E，300‑400μl Buffer F，涡旋震荡1‑3min，4℃温度条件下11000‑12000g离心1‑3min，取500‑1000ul上清液至1.5ml离心管，加入500‑1000μl的酚、氯仿和异戊醇酚的混合液，所述混合液中酚、氯仿和异戊醇的体积份数比为25:24:1，涡旋震荡30‑60s，4℃温度条件下13000‑16000g离心1‑3min，将上清液转移至1.5ml离心管，加入上清液等体积的Buffer G，震荡10‑30s，放置5‑10min，将1.5ml离心管放在磁力架上，进行磁珠分离，吸去液体，保留磁珠，往含有磁珠的1.5ml离心管中加入0.5‑2mlBuffer H，打匀后室温静止5‑10min，将1.5ml离心管放在磁力架上，进行磁珠分离，吸去液体，保留磁珠。往含有磁珠的1.5ml离心管中加入30‑60μl Buffer I，即得土壤微生物DNA溶液；所述Buffer E为5‑15％的SDS溶液；所述Buffer F由以下方法配制而成：取2‑3g LiCl，1‑2g Tris，3‑5g EDTA，加入双蒸水溶解并调节pH为7.0‑8.0，定容至100ml；所述Buffer G为4‑50ml异丙醇与1‑3ml磁珠混悬液的混合液，所述磁珠混悬液由磁珠和水按照1:2体积比配置而成，所述磁珠为粒径为0.5‑2um的硅基生物磁珠；所述Buffer H为10‑40ml的包含10‑30mM Tris，5‑10mM EDTA，100‑200mM Nacl的溶液与50‑100ml的无水乙醇混合而成；所述Buffer I为pH为7‑8的6‑10mM Tris溶液。