[发明专利]日本血吸虫雌虫发育调控关键核糖体蛋白的鉴定方法

摘要

本发明涉及一种日本血吸虫雌虫发育调控关键核糖体蛋白的鉴定方法，包括以下步骤：用血吸虫尾蚴分别感染小鼠；对感染后的小鼠在SPF级动物房饲养；分别收集单性和双性感染的日本血吸虫雌虫；分别对该雌虫做solexa分析与iTRAQ分析；通过对比这四个发育阶段核糖体蛋白表达谱和基因表达谱，得到雌虫在不同发育阶段，核糖体蛋白在蛋白和基因两个水平的表达特点。与现有技术相比，本发明通过Solexa和iTRAQ组合分析雌雄血吸虫合抱前后雌虫核糖体基因表达谱和蛋白表达谱，并结合real-time PCR和western技术验证，可有效确定雌虫发育调控中关键核糖体蛋白。该蛋白的鉴定将为通过影响虫体核糖体功能为目的，以干预宿主体内虫体发育并维持宿主伴随免疫保护力的防治措施的研发提供关键依据。

主权项

一种日本血吸虫雌虫发育调控关键核糖体蛋白的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用血吸虫尾蚴感染小鼠：包括单螺释放的血吸虫单性尾蚴进行的单性感染与多螺释放的混合尾蚴进行的双性感染两种方式；(2)对感染后的小鼠在SPF级动物房饲养，饲养包括两个阶段四个时期，即单性感染18天和23天以及双性感染18天和23天；(3)收集培养后小鼠体内的日本血吸虫：若单只小鼠仅获得雌虫，作为单性雌虫样本，若单只小鼠获得两性虫体，分离雌虫，作为双性雌虫样本；(4)将步骤(3)所得雌虫转移到Trizol试剂中，做solexa分析：分别分析不同雌虫样本基因表达谱，分析和比较不同样本核糖体基因表达差异；(5)将步骤(3)所得雌虫保存在生理盐水中，做iTRAQ分析：分别分析不同雌虫样本核糖体蛋白表达谱，分析和比较不同样本核糖体蛋白表达差异；(6)通过对比不同发育阶段核糖体蛋白表达谱和基因表达谱，得到雌虫在不同发育阶段，核糖体蛋白在蛋白和基因两个水平的表达特点。