[发明专利]一种超声处理促肝细胞生长素的制备方法

摘要

本发明公开一种超声处理促肝细胞生长素的制备方法，步骤如下：1)乳猪肝预处理；2)均质；3)超声处理：将乳猪肝匀浆置于超声波处理机内利用超声波在冰浴中处理得到超声匀浆；4)酶解：超声匀浆置于反应容器中，滴加盐酸至pH值为2.5-3.5，再加入胃蛋白酶搅拌后，将反应容器及其内容物置于水浴锅中水解得到酶解物料；5)灭活；6)离心；7)粗滤：将中性离心液先后经过截留分子量为100KD的中空纤维超滤装置和截留分子量为10KD的中空纤维超滤装置进行过滤得到粗滤液；8)超滤：粗滤液经截流分子量为6000D的超滤膜进行超滤得到促肝细胞生长素溶液。本发明工艺简单温和，提取率高；终产物活性较高，安全性高。

主权项

一种超声处理促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： S1、乳猪肝预处理：取乳猪肝，去除胆囊、筋膜和结缔组织，清水洗净，沥水后再用注射用水清洗，然后切成宽度为3‑5cm的小块或细条状，再置于绞肉机中绞成粒径为1‑3mm的乳猪肝颗粒； S2、均质：将S1得到的乳猪肝颗粒加入胶体磨中以3000‑3200rpm的转速研磨2‑3min得到乳猪肝糜，将乳猪肝糜和注射用水按重量比为7‑9:7‑9加入搅拌机中，以300‑320rpm的转速搅拌13‑16min得到乳猪肝匀浆； S3、超声处理：将S2得到的乳猪肝匀浆置于超声波处理机内利用超声波在冰浴中处理得到超声匀浆，超声波功率为500‑550W，超声波频率为45‑50kHz，超声波处理时间为60‑80s； S4、酶解：将S3得到的超声匀浆置于反应容器中，滴加2‑4mol/L盐酸溶液至pH值为2.5‑3.5，再加入胃蛋白酶以170‑210rpm的转速搅拌35‑38min后，将反应容器及其内容物置于40‑45℃的水浴锅中水解6‑7h得到酶解物料，其中乳猪肝匀浆与胃蛋白酶的重量比为99‑101:0.7‑0.8； S5、灭活：将S4得到的酶解物料水浴加热至81‑82℃，保温12‑15min后，将温度降至室温静置得到灭活匀浆； S6、离心：将S5得到的灭活匀浆加入离心瓶中，以4200‑4500rpm的转速离心11‑14min后，将上清液取出滴加2‑4mol/L氢氧化钠溶液至pH为6.8‑7.2得到中性离心液； S7、粗滤：将S6得到的中性离心液经过截留分子量为100KD的中空纤维超滤装置进行第一次过滤后，再经过截留分子量为10KD的中空纤维超滤装置进行第二次过滤得到粗滤液，其中第一次过滤和第二次过滤的回流压力为0.03‑0.06MPa； S8、超滤：将S7得到的粗滤液再经截流分子量为6000D的超滤膜进行超滤得到促肝细胞生长素溶液，其中进液压力为0.13‑0.16MPa，回流压力为0.03‑0.06MPa。