[发明专利]一种百合种球综合性脱毒方法

摘要

本发明提供了一种百合种球综合性脱毒方法，具体通过以下步骤完成：A、外植体生长点的剥取，B、热处理脱毒，C、外植体清洗消毒，D、生长点采集诱导培养，E、脱毒培养，F、病毒检测。该发明克服了现有技术存在的不足，综合运用热处理脱毒、茎尖培养脱毒和愈伤组织脱毒的脱毒方法，解决了单独使用一种方法存在的不足，该方法能有效减少病毒交叉感染的机会，脱毒率高，成活率高，能有效缩短种球培养周期。

主权项

百合种球综合性脱毒方法，其特征在于，包括以下步骤 ：A、 外植体生长点的剥取：选优质种球，用浓度为 20 ～ 40% 的多菌灵600倍溶液浸泡 30分钟；将消过毒的泥炭用水拌湿，使其含水量为 46 ～ 66%，备用；再将多菌灵浸泡后的种球种在拌湿的基质中，每箱下种 20 ～ 26 个种球，浇定根水，然后将泡过种球的多菌灵溶液洒在表面；按切花种植方法正常管理，保持基质 46 ～ 66% 的水分；在温度为 21 ～ 23℃，湿度为 70 ～ 80%，光照强度 1600 ～ 2000Lx，光照时间 8 ～ 12h/d 的条件下，经过 6 ～ 7 天后，芽长到 6 ～ 6cm 时进行热处理脱毒 ；B、 热处理脱毒：将温度控制在 36 ～ 38℃之间，湿度为 70 ～ 86%，光照强度 1600Lx， 光照时间 8 ～ 12h/d 的环境条件下，经过 7 ～ 16 天培养，芽长高并绽开成莲座状 ；C、 外植体清洗消毒：①用清水冲洗后，剥去部分叶片，用中性肥皂水洗 6 分钟，用纱布包好， 清水冲洗 12 小时； ②用浓度为 0.1% 的升汞浸泡 8 分钟；③再用浓度为 76% 的酒精浸泡 8 ～ 16 秒；④ 吐温 80 无菌水浸泡 2 ～ 3 分钟；⑤再用无菌水洗 6 ～ 7 遍至无泡沫 ；D、 生长点采集诱导培养：采集长度为 0.3 ～ 0.6 mm 的百合茎尖生长点接种到诱导培养基中培养，温度 21 ～ 23℃， 光照强度 1600 ～ 3000Lx， 光照时间 8 ～ 12h/d， 培养 40 ～ 60天后, 生长点膨大成直径 2 ～ 3cm 的叶丛，所述诱导培养基为：1 ／ 2MS+BA2.6 ～ 6mg/L+NAA0.26 mg/L+ 糖 40g/l+ 琼脂 6.6g/L ；E、 脱毒培养：将诱导出的叶丛切成 0.6cm 小块，接种于脱毒培养基中，脱毒培养基为：MS+ NAA0.2mg/L+ 0.4% 糖 + 活性炭 0.6%+ 病毒唑 6 mg/L+ 琼脂 6.0 g/L， 在温度为 21 ～23℃， 光照时间为 8 ～ 12h/d， 光照强度为 2000 ～ 3000Lx 的环境条件下， 经过 40 ～ 60 天培养，形成带球的瓶苗 ；F、病毒检测：将瓶苗采用 RT‑PCR 检测法检测，经检测确认无任何病虫害现象，并不带百合无症病毒、黄瓜花叶病毒和百合斑驳病毒，即为百合脱毒种，步骤 A 是用浓度为 40%的多菌灵 600 倍溶液浸泡种球 30 分钟，步骤 D 是采集长度为0.3 ～ 0.4mm 的百合茎尖生长点接种到诱导培养基中培养，步骤 D 是采集长度为0.3 ～ 0.4mm 的百合茎尖生长点接种到诱导培养基中培养。