[发明专利]一种采用酵母菌评价油田钻井液生物毒性的方法

摘要

本发明公开了一种采用酵母菌评价油田钻井液生物毒性的方法，包括（1）将酵母菌进行活化并培养至稳定期，得到的酵母菌培养液进行离心；（2）将上述离心后酵母菌体重悬后进行不连续密度梯度离心，收集最上层包含幼龄酵母菌或孢子的不连续密度梯度溶液，进行同步培养；（3）采用上述同步培养后得到的酵母菌作为评价菌种，或将酵母菌制成冻干粉剂使用。本发明采用同步培养得到的形态均一的酵母菌作为实验生物，可以在较短的反应时间内灵敏高效、稳定准确的评价油田钻井液的生物毒性，能够满足油田开发及生产中对快速评价油田钻井液生物毒性的需求。

主权项

1.一种采用酵母菌评价油田钻井液生物毒性的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）将酵母菌进行活化并培养至稳定期，得到的酵母菌培养液进行离心；（2）将上述离心后酵母菌体重悬后进行不连续密度梯度离心，收集最上层包含幼龄酵母菌或孢子的不连续密度梯度溶液，进行同步培养；不连续密度梯度离心的介质为海藻糖，在离心瓶中自下而上逐层铺加浓度递减的海藻糖水溶液，海藻糖水溶液的质量浓度为5%～70%，每层浓度逐级减少5%～30%；铺加3～5层海藻糖水溶液，每层体积相同或不同，以此制成海藻糖不连续密度梯度溶液；所述同步培养的培养温度为25～35℃，摇床转速为100～150rpm；（3）采用上述同步培养后得到的酵母菌作为评价菌种，或将酵母菌制成冻干粉剂使用；（4）使用标准毒性物质对酵母菌的生物毒性敏感性进行校正，同时确定油田钻井液对酵母菌的生物毒性分级指标；（5）将酵母菌制备成酵母菌悬液，菌悬液中菌体浓度范围为10⁴～10⁸个/mL，并按浓度梯度制备油田钻井液测试样品；（6）将酵母菌悬液与油田钻井液测试样品接触，通过染色法检测各浓度油田钻井液测试样品对酵母菌的致死率；酵母菌悬液与油田钻井液测试样品接触时间为5～10min；（7）计算油田钻井液测试样品对酵母菌的半数有效浓度EC₅₀，根据生物毒性分级指标确定油田钻井液生物毒性等级；所述的酵母菌为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）FE‑B，保藏编号为CGMCC No. 2735，或为热带假丝酵母（Candida tropicalis）突变株PF‑UV‑56，保藏编号为CGMCC No. 0356。