[发明专利]提高盐霉素发酵水平的方法

摘要

一种提高盐霉素发酵水平的方法，是通过在白色链霉菌DSMZ41398中失活位于SLNWT0868‑SLNWT0920(1,173,724bp‑1,276,916bp)的I型PKS生物合成基因簇，减少其对盐霉素生物合成前体物的竞争，实现盐霉素产量的提高。采用本发明的方法，可使盐霉素的发酵终产量提高8倍以上，实验室摇瓶水平达到6.3g/L。

主权项

一种提高盐霉素发酵水平的方法，是通过在白色链霉素DSMZ41398(Streptomyces albus DSMZ41398)的染色体1,200,120bp‑1,200,750bp位置引入基因突变，导致位于SLNWT0868‑SLNWT0920(1,173,724bp‑1,276,916bp)的I型PKS生物合成基因簇失活，使盐霉素在发酵中的产量得以提高；所述白色链霉素DSMZ41398染色体上1,200,120bp‑1,200,750bp的序列如SEQ ID NO.1所示；所述I型PKS生物合成基因簇失活的构建步骤如下：第一步：设计并构建用于1,200,120bp‑1,200,750bp区域进行失活的同源重组质粒载体I；第二步：将第一步构建得到的质粒载体I结合转移导入受体菌白色链霉素DSMZ41398中进行同源重组；第三步：通过对突变株的筛选和验证硫链丝菌素抗性验证，并通过PCR产物片段大小的差异筛选得到SLNWT0868‑SLNWT0920(1,173,724bp‑1,276,916bp)的I型PKS生物合成基因簇失活的突变株；所述的质粒载体I的构建方法是在质粒pJTU1278的SpeI/KpnI位点插入来自1,200,120bp‑1,200,750bp区域左侧1410的PCR片段SpeI/HindIII和来自1,200,120bp‑1,200,750bp区域右侧1352bp的PCR片段HindIII/KpnI；所述的发酵是指将链霉菌孢子或者菌丝体在TSBY培养基中于33℃、220转/分钟的转速下培养36～48小时后，转接到种子培养基，于33℃、220转/分钟的转速下培养16～20小时后，再转接到发酵培养基发酵9天，所述TSBY培养基含有：TSB 3％，酵母提取物0.5％，蔗糖10.3％；所述种子培养基含有：葡萄糖4％，黄豆饼粉3％，酵母提取物1％，碳酸钙0.2％；所述发酵培养基含有：胚芽粉0.8％，黄豆饼粉0.5％，氯化钾0.22％，氯化钠0.1％，尿素0.16％，酒石酸0.2％，硫酸镁0.01％，磷酸氢二钾0.01％，碳酸钙0.5％，大豆油15％。