[发明专利]一种用于测序的高通量扩增质粒的方法在审
| 申请号： | 201410593687.4 | 申请日： | 2014-10-29 |
| 公开（公告）号： | CN104328111A | 公开（公告）日： | 2015-02-04 |
| 发明（设计）人： | 董志;李桂澜 | 申请（专利权）人： | 北京大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京国坤专利代理事务所(普通合伙) 11491 | 代理人： | 姜彦 |
| 地址： | 100871 北京市海淀区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明一种用于测序的高通量扩增质粒的方法，属于质粒扩增技术领域。包括：将10×phi29 DNA聚合酶缓冲液、Hexamer引物、待测样品和去离子水混合均匀，在95℃加热3分钟，然后置于冰上冷却，得到反应液(Ⅰ)；在反应液(Ⅰ)中加入浓度为dNTP、100×BSA和phi29 DNA聚合酶，将其混合均匀，在30℃温育8小时，最后在65℃加热10分钟，得到反应液(Ⅱ)；将反应液(Ⅱ)用灭菌去离子水稀释3-6倍后，得到用于测序的DNA。本发明具有可以利用混合质粒库或单一质粒转化的大肠杆菌菌落作为模板，省去大量提取质粒的时间和人力消耗的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 通量 扩增 质粒 方法 | ||
【主权项】：
一种用于测序的高通量扩增质粒的方法，包括下述步骤：(1)、将10×phi29 DNA聚合酶缓冲液1.0μL、浓度为100μM的Hexamer引物2.5μL、待测样品0.5μL和去离子水4.9μL混合均匀，在95℃加热3分钟，然后置于冰上冷却，得到反应液(Ⅰ)；(2)、在反应液(Ⅰ)中加入浓度为10mM的dNTP 0.5μL、100×BSA 0.1μL和phi29 DNA聚合酶0.5μL，使总反应体系为10.0μL，将其混合均匀，在30℃温育8小时，最后在65℃加热10分钟，得到反应液(Ⅱ)；(3)、将步骤(2)中得到的反应液(Ⅱ)用灭菌去离子水稀释3‑6倍后，得到可直接用于测序的DNA。
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