[发明专利]免疫亲和柱净化-液相色谱-串联质谱测定海洋生物中河豚毒素的方法有效
| 申请号： | 201410603308.5 | 申请日： | 2014-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN104391061A | 公开（公告）日： | 2015-03-04 |
| 发明（设计）人： | 张小军;王莹;伦丽丽 | 申请（专利权）人： | 浙江省海洋水产研究所;江苏美正生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/06 | 分类号： | G01N30/06 |
| 代理公司： | 杭州杭诚专利事务所有限公司 33109 | 代理人： | 尉伟敏 |
| 地址： | 316021 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种免疫亲和柱净化-液相色谱-串联质谱测定海洋生物中河豚毒素的方法，其基于液相色谱串联质谱的高灵敏性和精确性，利用免疫亲和柱的独特选择识别性，能快速、简便、高效测定海洋生物中的河豚毒素。 | ||
| 搜索关键词： | 免疫 亲和 净化 色谱 串联 测定 海洋生物 河豚毒素 方法 | ||
【主权项】：
一种免疫亲和柱净化‑液相色谱‑串联质谱测定海洋生物中河豚毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品处理：准确称取已充分均质样品2.00g于50mL具塞离心管中，加入10mL含有1％乙酸的甲醇溶液，涡旋振荡2min，60℃水浴超声提取15min，冷却至室温后，6000r/min离心5min，移取5mL上清液至另一50mL离心管中，加入20ml PBS溶液进行稀释，用1mol/L氢氧化钠溶液调节PH至7～8，得样品液；(2)免疫亲和柱净化：免疫亲和柱上样品液，上样结束后，用水淋洗亲和柱，挤干柱内残留液，并弃去以上全部流出液，最后用含有1％乙酸的甲醇溶液洗脱，收集的洗脱液于60℃氮气吹干，用1mL流动相定容溶解得净化液；(3)液相色谱‑质谱分析：净化液经滤膜过滤后供液相色谱‑串联质谱仪测定获得河豚毒素的峰面积，将峰面积代入标准曲线分析计算，从而获得样品中河豚毒素的含量。
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