[发明专利]一种快速提高丹参中迷迭香酸含量的方法

摘要

本发明涉及生物技术和植物学技术领域，本发明提供了一种快速提高丹参中迷迭香酸含量的方法，是将外植体接种于MS基本培养基附加2,4‑D、6‑BA、NAA在一定条件下培养得到颜色有光泽呈鲜黄绿色，生长旺盛，疏松的丹参愈伤组织；将上述愈伤组织接种到于与上述所使用的MS固体培养基相同组分和含量的液体培养基中，一定条件下振荡培养，反复继代，得到分散性良好的悬浮细胞系并通过茉莉酸甲酯进行诱导培育出迷迭香酸含量高的丹参细胞系，实现人工培养，达到规模化生产的目的。

主权项

一种快速提高丹参中迷迭香酸含量的方法，包括如下步骤：A、外植体处理：取丹参种子作为外植体，接种到MS空白培养基上，培养成为无菌苗，在无菌状态下将丹参无菌苗幼叶、茎、根分别剪下，叶片成块，茎及根成段；B、愈伤组织的诱导：选用MS作为丹参愈伤组织诱导的基本培养基，将步骤A制备好的外植体接种于MS培养基中添加0.5mg/L的2,4‑二氯苯氧乙酸、0.5mg/L的6‑苄氨基腺嘌呤、0.5mg/L的萘乙酸、0.1mg/L的Vc，培养基的蔗糖浓度为3％，琼脂浓度为1％，pH值为5.0‑6.5，在光照12小时/天，光照强度为3000Lux条件下培养30天，温度为25℃，得到颜色有光泽呈鲜黄绿色、生长旺盛、疏松的愈伤组织；C、细胞的悬浮培养：将步骤B得到的愈伤组织接种到于与步骤B中所使用的MS培养基相同组分和含量的液体培养基中，培养温度28℃，黑暗条件下，120r/min振荡培养，每18‑20天进行一次继代培养，继代培养3‑15次后得到分散性良好的悬浮细胞系；D、茉莉酸甲酯诱导丹参悬浮细胞：在无菌条件下，取新鲜继代5次以上得到丹参悬浮细胞，按悬浮细胞体积计算，将茉莉酸甲酯用无菌注射器通过无菌过滤膜注入悬浮细胞系中，终浓度为0.1mM/L，培养12天以上。