[发明专利]一种从病人痰液中提取小分子α防御素多肽的方法

摘要

本发明涉及一种从病人痰液中提取小分子α防御素多肽的方法，包括以下步骤：1，病人痰液的收集与保存；2，向痰液标本中加乙酸制备匀浆，搅拌浸提，匀浆离心，取上清液制备粗提物；3，向粗提物中加入DTT，混匀，获得混合物；4，将混合物上样于Pullulan凝胶柱，用乙酸常温下洗脱纯化，制备洗脱曲线，监测洗脱液收集，并提取物取样送质谱检测；5，超滤浓缩，真空冻干保存；6，对提取物进行蛋白质氨基酸测序，并琼脂糖弥散法检测提取物对大肠杆菌的抗菌活性。本发明的优点为制备简便，成本低，产量高，所得产品为高纯度、高抗微生物生物活性的天然α防御素，明显优于常用的化学合成及重组蛋白方法。

主权项

一种从病人痰液中提取小分子α防御素多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)收集病人的痰液，并保存在冰水混合物状态；(2)向步骤(1)得到的痰液中加乙酸匀浆，4℃过夜搅拌浸提，离心，弃沉淀，取上清，制备粗提物；(3)向步骤(2)中得到的粗提物中加入DTT，混匀；(4)将步骤(3)得到的混合物上样于Pullulan P‑10凝胶柱，用乙酸洗脱，用自动收集器直接收集洗脱液到各收集管内，每管10mL；经蛋白质检测仪监测在波长620nm的吸光度，并制作出洗脱曲线；根据洗脱曲线，从开始点和第一个高峰点收集到的洗脱液中取样进行蛋白分子质谱分析定性；(5)将步骤(4)收集的洗脱液超滤浓缩，得到小分子多肽，真空冻干保存；(6)用步骤(5)得到的小分子多肽做蛋白氨基酸测序，并用琼脂糖弥散法检测其对大肠杆菌的抗菌活性。