[发明专利]口蹄疫病毒衣壳蛋白串联共表达和病毒样颗粒的制备方法

摘要

本发明涉及大肠杆菌来源的以单个质粒串联可溶共表达口蹄疫病毒衣壳蛋白VP0(其为VP4和VP2的基因融合)，VP1和VP3，以及口蹄疫病毒衣壳蛋白病毒样颗粒的制备方法。口蹄疫病毒衣壳蛋白病毒样颗粒可以用于口蹄疫疫苗的制备。本发明提供的方法，从多个方面对大肠杆菌可溶共表达口蹄疫病毒衣壳蛋白进行了研究，综合运用串联共表达和带SUMO标签的技术可溶共表达口蹄疫病毒衣壳蛋白VP0(其为VP4和VP2的基因融合)，VP1和VP3，最终获得的目的蛋白占到菌体总蛋白的约20％，纯化获得的口蹄疫病毒衣壳蛋白成功组装成病毒样颗粒。

主权项

口蹄疫病毒衣壳蛋白串联可溶共表达的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将经过密码子优化的口蹄疫病毒衣壳蛋白VP0基因，VP1和VP3的全长基因分别克隆入质粒pETSUMO，分别获得pETSUMO‑VP0，pETSUMO‑VP1和pETSUMO‑VP3三个质粒，其中VP0基因为VP4和VP2的基因融合而成，其核苷酸序列如Seq ID No.1a所示，VP1基因的核苷酸序列如Seq ID No.1b所示，VP3基因的核苷酸序列如Seq ID No.1c所示；(2)用PCR方法从pETSUMO‑VP3，pETSUMO‑VP1和pETSUMO‑VP0三个质粒中分别扩增出RBS‑SUMO‑VP3，RBS‑SUMO‑VP1和RBS‑SUMO‑VP0DNA片段，按VP3，VP1和VP0顺序克隆入同一个pET28b质粒，获得重组表达质粒pET‑TRI‑Asia1‑VP310，其中RBS指核糖体结合位点；(3)将所述重组表达质粒pET‑TRI‑Asia1‑VP310转化大肠杆菌，获得基因工程菌；(4)所述基因工程菌进行发酵培养，IPTG诱导串联可溶共表达带有SUMO标签的口蹄疫病毒衣壳蛋白VP3，VP1和VP0；(5)回收基因工程菌菌体破碎后的上清液，亲和色谱层析分离纯化带有SUMO标签的口蹄疫病毒衣壳蛋白VP3，VP1和VP0蛋白混合物；(6)酶切去除SUMO标签后，分子筛色谱层析分离纯化获得口蹄疫病毒衣壳蛋白VP3，VP1和VP0蛋白混合物，并组装成病毒样颗粒。