[发明专利]一种获取植物雄蕊表达启动子STA3的方法及相应启动子

摘要

本发明提供了一种获取植物雄蕊表达启动子STA3的方法，所述方法包括如下步骤：制备正、反向引物；以水稻品种日本晴的DNA序列为模板，利用所述正向引物和所述反向引物，对日本晴的DNA序列中的一目的片段进行PCR扩增；对所述目的片段进行加A并连接PGEM-T-Easy载体；将目的片段转入到激活的感受态细胞中；挑取单克隆摇菌液提质粒；回收所述目的片段。本发明的分离方法能够从日本晴水稻中有效地分离出能够驱动雄蕊中的外源基因表达的启动子。本发明的方法简单易行，能够为人们提供现有技术中尚未发现的STA3启动子。该启动子STA3能够调控外源基因在植株的雄蕊中集中表达，具有显著的研究和商业价值。

主权项

一种获取植物雄蕊表达启动子STA3的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：步骤(1)制备正向引物，所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No:2所示；步骤(2)制备反向引物，所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No:3所示；步骤(3)以水稻品种日本晴的DNA序列为模板，利用所述正向引物和所述反向引物，采用KOD‑plus高保真DNA聚合酶对日本晴的DNA序列中的一目的片段进行PCR扩增，该目的片段的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示；步骤(4)对所述目的片段进行加A并连接PGEM‑T‑Easy载体；步骤(5)，利用该载体转化大肠杆菌XL‑Blue感受态细胞，使感受态细胞激活，进而将目的片段转入到激活的感受态细胞中；步骤(6)挑取单克隆摇菌液提质粒，用所述正向引物和所述反向引物进行双酶切验证，将经过鉴定的阳性克隆进行测序，验证正确的克隆即为所要获得的目的片段——启动子STA3，其核酸序列如SEQ ID No:1所示；步骤(7)，回收所述目的片段。