[发明专利]磁响应性复合脂肪酶的制备方法及生物柴油合成中的应用

摘要

本发明涉及一种具有磁响应性复合脂肪酶的制备方法，并将磁响应性复合脂肪酶应用于生物柴油的制备，属于固定化酶应用于生物柴油制备技术领域。本发明利用磁性纳米Fe₃O₄对具有1，3位置专一性的脂肪酶A进行修饰，采用固定化技术将具有1，3-位置专一性的脂肪酶A与无位置专一性的脂肪酶B制备成复合酶双酶体系，利用复合脂肪酶协同催化的方法，克服了单一脂肪酶的底物专一性，提高了酶法制备生物柴油的转酯效率，可以实现酶的回收和重复使用，减少了反应过程中酶活力的损失。

主权项

一种磁响应性复合脂肪酶的制备方法，其特征是包括步骤：（1）磁响应性脂肪酶液A的制备：以单分散水溶性纳米磁性纳米四氧化三铁颗粒为修饰剂，对具有1，3位置专一性的脂肪酶A进行修饰，并用pH 8.0的磷酸盐缓冲溶液分别配制成酶活力浓度为5‑25U/mL的磁响应性脂肪酶液A；（2）用pH 8.0的磷酸盐缓冲溶液配制5‑20U/mL的无位置专一性的脂肪酶液B；（3）按磁响应性脂肪酶A与脂肪液B的体积比为(0.5‑10)：1的比例配制脂肪酶混合液；（4）用pH 8.0‑10.0的磷酸盐缓冲液配制质量分数为3‑6%的海藻酸钠溶液；（5）按体积比为2：1的比例将脂肪酶混合液加入到海藻酸钠溶液中，搅拌0.5‑2 h，配置成海藻酸钠混合溶液； （6）吸取上述海藻酸钠混合溶液逐滴滴入质量分数1‑5%的CaCl₂溶液中，形成直径为2‑3 mm的微胶囊球，滤出凝胶小球，更换质量分数1‑5% CaCl₂溶液硬化3‑5 h后加入质量分数1%戊二醛溶液，置于4℃环境固定化3‑12 h；将微胶囊滤出，分别用蒸馏水、磷酸盐缓冲液过滤洗涤几次后，置于4℃冰箱保存备用。