[发明专利]一种固定化酶的制备方法

摘要

本发明提供了一种固定化酶的制备方法，本发明采用角蛋白与聚(丙烯酸甲酯‑丙烯酸)复合纳米纤维膜作为固定化酶载体，制备得到的纳米纤维膜有高比表面积、高孔隙率、良好生物相容性，为固定化酶提供生物友好的微环境，有效的提高固定化酶催化活性和稳定性。跟现有技术相比，本发明提供的方法工艺简单，而且制备得到的固定化酶有高的载酶量，催化稳定性好，重复使用性好。

主权项

一种固定化酶的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(1)、将角蛋白与聚（丙烯酸甲酯‑丙烯酸）溶解在N,N‑二甲基甲酰胺中，完全溶解后，获得纺丝液，注入静电纺丝装置中进行静电纺丝，将获得的复合纳米纤维膜置于真空干燥箱中在25℃~40℃条件下干燥5 ~10h，即得到角蛋白与聚（丙烯酸甲酯‑丙烯酸）复合纳米纤维膜；（2）、将角蛋白与聚（丙烯酸甲酯‑丙烯酸）复合纳米纤维膜浸入质量分数为3%~6%的戊二醛溶液中，25℃水浴震荡1~4h，震荡速度40~100 r/min，取出后用蒸馏水冲洗，再浸入1~15mg/ml的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚铵盐酸盐/N‑羟基琥珀酰亚胺的磷酸盐缓冲液中震荡活化1~4h，震荡速度40~100r/min；取出后在pH为7的磷酸盐缓冲液反复冲洗，得到活化后的角蛋白与聚（丙烯酸甲酯‑丙烯酸）复合纳米纤维膜；（3）、将活化后的角蛋白与聚（丙烯酸甲酯‑丙烯酸）复合纳米纤维膜浸入浓度为0.4~1.0mg/ml酶的磷酸盐缓冲液中，密闭后在4~25℃的恒温条件下震荡1~4h，震荡速度为40~100 r/min，取出，用磷酸盐缓冲液反复冲洗5次，即可得到角蛋白与聚（丙烯酸甲酯‑丙烯酸）复合纳米纤维膜固定化酶；步骤（1）所述角蛋白与聚（丙烯酸甲酯‑丙烯酸）的质量比为1:4‑9；步骤（1）所述聚（丙烯酸甲酯‑丙烯酸）的丙烯酸甲酯与丙烯酸质量比为9‑19:1；步骤（2）中所述1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚铵盐酸盐/N‑羟基琥珀酰亚胺的磷酸盐缓冲液，其中1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚铵盐酸盐与N‑羟基琥珀酰亚胺的磷酸盐的摩尔比为1:2‑4。