[发明专利]一种从Cohn组分I沉淀分离纤维蛋白原的方法

摘要

一种从Cohn组分Ⅰ沉淀分离纤维蛋白原的方法。使用4:3-1:1的柠檬酸三钠-氯化钠溶液作为纤维蛋白原分离的缓冲液，蛋白质分离过程中的温度不高于0℃,使用不低于5%的蔗糖作为冻干保护剂。

主权项

一种从Cohn组分I沉淀分离纤维蛋白原的方法，其特征在于其分离过程为：1）原料血浆融化合并，加入乙醇使反应液乙醇浓度为8%，温度控制在‑3.5～‑2.5℃，蛋白含量控制在40～60g/L，pH 7.0～8.0，后离心分离组分I沉淀；2）组分I沉淀称重后，溶解于10倍～50倍体积的缓冲液I中，按照5g/L的比例加入预处理的硅藻土过滤；（缓冲液I为4:3‑1:1的柠檬酸三钠‑氯化钠溶液）；3）调整澄清液的pH为6.5～7.5，蛋白含量为10～20g/L，计算体积，加入3.3%的TNBP（磷酸三丁酯）和11%的Tween‑80，使其终含量为0.3%和1%，23.5～24.5℃保温6小时；4）调整溶液的pH为6.5～7.5，降温，加50%乙醇至反应液乙醇浓度为8%，温度控制在‑3～‑1℃，离心分离沉淀物，得粗制纤维蛋白原沉淀；5）粗制纤维蛋白原沉淀称重后，按沉淀重量加10倍体积的缓冲液I溶解沉淀，加硅藻土（按5g/L的比例）澄清过滤；6）调整滤液的pH为6.5～7.5，蛋白含量为10～20g/L，降温，加50%乙醇至反应液乙醇浓度为8%，温度控制在‑3～‑1℃，离心分离沉淀物，得精制纤维蛋白原沉淀；7）精制纤维蛋白原沉淀称重后，按沉淀重量加5倍体积的缓冲液II溶解，澄清过滤，取样进行原液检定；（缓冲液II为8:13:51‑9:14:50的氯化钠‑柠檬酸三钠‑蔗糖溶液）；8）配制、除菌过滤、灌装、冻干；9）冻干后制品100℃±0.5℃干热灭活处理30分钟；成品检验合格后包装。