[发明专利]一种三明治样多细胞片层的制备方法

摘要

本发明公开了一种三明治样多细胞片层的制备方法，包括如下步骤：电纺液配制步骤，向三氟乙醇溶剂中加入壳聚糖和胶原，所述壳聚糖和胶原的质量比范围是1:4～4:1，搅拌得到电纺液；静电纺丝步骤，将所述电纺液高压静电纺丝得到壳聚糖‑胶原电纺生物膜；细胞‑膜‑细胞多细胞片层构建步骤，将两个细胞片层分别附着在所述壳聚糖‑胶原电纺生物膜两面生长，最终得到细胞‑膜‑细胞多细胞片层。本方法制备工艺简单可控，以电纺生物膜作为支撑膜，让两个细胞片层贴附在生物膜上生长，既增加了细胞的增殖空间，增加了两个细胞片层间营养物质的流通，又保证了细胞片层在转移过程中的完整性，从而给临床多细胞片层移植治疗提供了一个简便易行的操作方法。

主权项

一种三明治样多细胞片层的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：电纺液配制步骤，向三氟乙醇溶剂中加入壳聚糖和胶原，所述壳聚糖和胶原的质量比范围是1:4～4:1，搅拌得到电纺液；静电纺丝步骤，将所述电纺液高压静电纺丝得到壳聚糖‑胶原电纺生物膜；细胞‑膜‑细胞多细胞片层构建步骤，将两个细胞片层分别附着在所述壳聚糖‑胶原电纺生物膜两面生长，最终得到细胞‑膜‑细胞多细胞片层；所述细胞‑膜‑细胞多细胞片层构建步骤中，将灭菌后的所述壳聚糖‑胶原电纺生物膜置于在第一温敏培养皿表面已生长融合的第一细胞片层上；降低温敏培养表面的温度至20‑25℃，10‑30min后将所述第一细胞片层从边缘剥离；上下颠倒附着有所述第一细胞片层的壳聚糖‑胶原电纺膜，并将其置于第二温敏培养皿的第二细胞片层上，形成的多细胞片层在温敏培养表面生长后，降低温敏培养表面的温度至20‑25℃，10‑30min后剥离得到所述细胞‑膜‑细胞多细胞片层。