[发明专利]一种基孔肯雅病毒的微流体基因芯片检测方法

摘要

本发明涉及一种快速、灵敏的基孔肯雅病毒微流体基因芯片检测方法。本发明的检测方法整合了逆转录聚合酶链式反应RT-PCR和微阵列Microarray这两种强大的分子生物学技术，将RT-PCR与微阵列芯片杂交反应腔整合到一张芯片上，PCR杂交的探针直接固定在微阵列中的杂交舱中。本发明的检测方法包括如下步骤：样本处理，RNA核酸提取，RT-PCR扩增反应，杂交，清洗，结果判定。通过本发明可大幅度提高出入境口岸一线检验检疫人员的检测效率，既可减少工作量、又可最大限度地解决传统检测方法可能存在的阳性漏检问题，从而最大限度地防止重大虫媒传染病的输入。

主权项

一种基孔肯雅病毒的微流体基因芯片检测方法，其特征在于：包括以下检测步骤：(1)样本混匀处理；(2)RNA核酸提取；(3)RT‑PCR扩增反应：a.RT‑PCR反应体系包括：RT‑PCR反应液,特异性正、反向引物混合液，逆转录酶/DNA聚合酶，DEPC水,RT‑PCR质控品,样本RNA核酸；b.将RT‑PCR反应液加入已固化特异性探针的芯片内，将芯片放入反应室内进行扩增反应；所述的特异性引物和探针是根据E2基因特异性引物扩增区内设计，能够区别其他病毒株，特异性引物和探针为：CHIKV‑F:5‑AAGCTYCGCGTCCTTTACCAAG‑3(SEQ ID NO 1)CHIKV‑R:5‑CCAAATTGTCCYGGTCTTCCT‑3(SEQ ID NO 2)CHIKV‑Probe:5‑CCAATGTCYTCMGCCTGGACACCTTT‑3(SEQ ID NO 3)(4)杂交：RT‑PCR扩增完后，加入杂交反应液，使杂交液和扩增液都进入到杂交舱内进行杂交反应；(5)清洗：杂交后的芯片用洗液冲洗，直接用荧光扫描仪检测；(6)结果判定：根据杂交结果，判定感染情况。