[发明专利]一种用于指导伊立替康类化疗药物个体化治疗的UGT1A1联合基因位点荧光检测试剂盒

摘要

本发明提供一种检测试剂盒，以UGT1A1*60(‑3279T/G)，UGT1A1*93(‑3156G/A)，UGT1A1*28(‑53 6/7)及UGT1A1*6(211G/A)这四个位点为检测对象，以分子信标探针荧光定量PCR为基础，对上述4个基因位点进行基因分型检测。本发明一次性检测出四个位点，大大节约了成本，为临床诊断和相关领域科研提供可靠方法。 1

主权项

1.一种用于指导伊立替康类化疗药物个体化治疗的UGT1A1联合基因位点荧光检测试剂盒，其特征在于，使用所述试剂盒进行PCR扩增时，扩增阶段反应在一个复合扩增反应体系中同时扩增UGT1A1*60(‑3279 G＞A)；UGT1A1*93(‑3156 T＞A)；UGT1A1*28(‑536/7)及UGT1A1*6(211 G＞A)4个基因位点；

其中，用于UGT1A1*28(‑536/7)检测的引物为：

SEQ NO.1：5’‑ACGCCCACTTGTCCTGGGCCTG‑3’

SEQ NO.2：5’‑ACACACACAGCAGCAGGC‑3’；

用于UGT1A1*6(211G＞A)4检测的引物为：

SEQ NO.3：5’‑AGTTGTCCTAGCACCTGACG‑3’

SEQ NO.4：5’‑AAAACATTATGCCCGAGACT‑3’；

用于UGT1A1*60(‑3279T＞G)；UGT1A1*93(‑3156G＞A)检测的引物为：

SEQ NO.5：5’‑TCTAGTTACATAACCTGAAACCCGG‑3’

SEQ NO.6：5’‑TTGCTCTCAAAACTCTGGG‑3’；

用于对人基因组DNA进行检测的通用引物为：

SEQ NO.7：5′CAAAAGGGTCATCATCTCTGCC 3′

SEQ NO.8：5′AGCGTGTCCATAGGGTGCC 3′；

用于UGT1A1*28(‑536/7)检测的野生型及突变型探针为：

28_W：5′cgcaGCCATATATATATATATAAGTAGACtgcg 3′

28_M：5′cgcagCCATATATATATATATATAAGTAGGACtgcg 3′

用于UGT1A1*6(211 G＞A)4检测的野生型及突变型探针为：

6*W：5′cgcggACGGAGCATTTTACACCTTGAAGACcgcg 3′

6*M：5′cacgCAGAGACAGAGCATTTTACACCTTGAAcgtg 3′

用于UGT1A1*60(‑3279 T＞G)检测的野生型及突变型探针为：

60*W：5′cggacTCAGTTTGAACAAAGCAATTTGAGAAgtccg 3′

60*M：5′cggacCAGTGTGAACAAAGCAATTTGAGAACtccg 3′

用于UGT1A1*93(‑3156 G＞A)检测的野生型及突变型探针为：

93*W：5′CAGCGCAGCCCACCTGTCCAAGCTCGCTG 3′

93*M：5′CACAGCCAGCCCACCTGTCTAAGCTCTGTG 3′

用于对人基因组DNA进行检测的通用探针为：

SEQ NO.15：5’‑caggCTTCCTCACCTGATGATCTTGAGGCcctg‑3′；

所述各位点的复合扩增采用聚合酶链式反应来实现，采用荧光定量PCR进行实时检测，通过与标准品的同步扩增和分析，得出所测标本的分型信息；

扩增程序：94‑98℃1‑5min；45个循环的94‑98℃5‑10s，55‑65℃30‑50s。