[发明专利]一种L-天冬氨酸β-脱羧酶产生菌的高通量筛选方法有效
| 申请号： | 201410654586.3 | 申请日： | 2014-11-17 |
| 公开（公告）号： | CN105648036B | 公开（公告）日： | 2020-05-19 |
| 发明（设计）人： | 李东升;傅风华;张淑敏;杨小平 | 申请（专利权）人： | 山东国际生物科技园发展有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/527 | 分类号： | C12Q1/527;C12Q1/04;C12R1/40 |
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| 地址： | 264670 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种L‑天冬氨酸β‑脱羧酶产生菌的高通量筛选方法。该方法包括如下步骤：1)采用富集培养基对样品中的微生物进行富集培养与初步分离；2)然后将平板分离得到的单菌落接种96微孔板初筛半固体培养基，初筛得到L‑天冬氨酸β‑脱羧酶产生菌；3)对初筛得到的菌株接种24孔板液体培养，结合纸层析法复筛得到L‑天冬氨酸β‑脱羧酶高产菌株；4)对复筛得到的高产菌株进行摇瓶发酵，结合氧化显色法确认酶活性。本发明方法适用于L‑天冬氨酸β‑脱羧酶产生菌的高通量筛选，筛选的菌株具有耐碱性能，在细胞生产过程中避免了繁琐pH值控制步骤。同时也为同类生物酶产生菌的高通量筛选提供参考。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 天冬氨酸 脱羧酶 产生 通量 筛选 方法 | ||
【主权项】：
一种L‑天冬氨酸β‑脱羧酶产生菌的高通量筛选方法，包括如下步骤：1)采用富集培养基对样品中的微生物进行富集培养与初步分离；2)将步骤1)分离得到的单菌落穿刺接种微孔板初筛半固体培养基，培养后根据培养基的浑浊程度筛选L‑天冬氨酸β‑脱羧酶产生菌；3)将步骤2)初筛得到的菌株接种微孔板液体培养，收集菌体进行生物转化，采用纸层析法分析生成的L‑丙氨酸含量，得到L‑天冬氨酸β‑脱羧酶高产菌株；4)将步骤3)复筛得到的高产菌株进行摇瓶发酵培养，收集菌体进行生物转化，然后氧化显色法测定L‑天冬氨酸β‑脱羧酶酶活性。
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